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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 1×106 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1245 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常骨髓血組織 | 種屬來(lái)源 | 小鼠 |
詳細(xì)介紹
GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP
一、細(xì)胞基本屬性
細(xì)胞名稱 | GFP小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞永生化+GFP |
產(chǎn)品規(guī)格 | 1×106 |
商品貨號(hào) | A01X1245 |
細(xì)胞詳述
骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞是骨髓基質(zhì)干細(xì)胞，對(duì)骨髓中的造血干細(xì)胞（HSC）不僅有機(jī)械支持作用，還能分泌多種生長(zhǎng)因子（如IL-6，IL-11，LIF，M-CSF及SCF等）來(lái)支持造血。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells，BMSCs)具有多向分化潛能，能促進(jìn)間充質(zhì)組織的再生，如：骨、軟骨、肌肉、韌帶、肌腱、脂肪及基質(zhì)等組織。
在骨髓中，BMSCs占骨髓有核細(xì)胞總數(shù)的0.001%~0.1%，含量極低。而同時(shí)，由于組織工程需要大量的種子細(xì)胞，從嚙齒類動(dòng)物骨髓分離BMSCs的技術(shù)上的難度限制了許多實(shí)驗(yàn)的開(kāi)展。體外分離培養(yǎng)純度高、活力強(qiáng)、生物特性均一的BMSCs對(duì)組織工程及細(xì)胞的體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)顯得至關(guān)重要。
該細(xì)胞通過(guò)慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶SV40+GFP基因。
細(xì)胞篩選
該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其GFP熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。 建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。
初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基維持培養(yǎng)，若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的培養(yǎng)基繼續(xù)篩選，以此類推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。
細(xì)胞特性
1） 組織來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的正常骨髓血組織。
2） 細(xì)胞鑒定：CD44免疫熒光染色為陽(yáng)性。
3） 經(jīng)鑒定細(xì)胞純度高于90%。
4） 不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。
5） 細(xì)胞生長(zhǎng)方式：長(zhǎng)梭形細(xì)胞，不規(guī)則細(xì)胞，貼壁培養(yǎng)。
實(shí)驗(yàn)步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺(tái)中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開(kāi)顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動(dòng)以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細(xì)解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細(xì)胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過(guò)夜所制備的細(xì)胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細(xì)胞分離培養(yǎng)的思路：
取材--分離--培養(yǎng)--鑒定
首先將組織從機(jī)體中取出，經(jīng)胰dan白酶/膠原酶處理后分散成單細(xì)胞，再在合適的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，使細(xì)胞繁殖到一定系數(shù)后進(jìn)行細(xì)胞鑒定。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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KLE人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | PE-Cy7標(biāo)記的鋅指蛋白518抗體 |
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KTC-1人甲狀腺癌細(xì)胞專用培養(yǎng)基 | PE-Cy7標(biāo)記的接頭蛋白DOK7抗體 |
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注意事項(xiàng)：
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，yi酶消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
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