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            上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞凋亡與增殖>>Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒

            Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒

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            • Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒

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            更新時間:2022-04-19 16:42:35瀏覽次數(shù):253

            聯(lián)系我們時請說明是化工儀器網(wǎng)上看到的信息,謝謝!

            產(chǎn)品簡介

            供貨周期 現(xiàn)貨 規(guī)格 50次
            貨號 FS-X9557 應(yīng)用領(lǐng)域 化工
            主要用途 公司產(chǎn)品僅用于科研    
            Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒公司*的商品:食道癌抑制生長蛋白抗體2-金剛烷 ADAMANTANONE, 2-(SG)Human, Mouse, Rat
            RAS家族關(guān)聯(lián)結(jié)構(gòu)域蛋白8抗體1-金剛 ADAMANTANOL, 1-(SG)Human, Mouse, Rat
            雄激素受體相關(guān)蛋白24抗體仙鶴草酚 B AGRIMOL B(P)Human, Mouse, Rat

            詳細介紹

            培養(yǎng)操作步驟:

            1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

            2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

            3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

            4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

            5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

            產(chǎn)品屬于:

            中文名稱

            英文名稱

            產(chǎn)品規(guī)格

            發(fā)貨周期

            Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒

            Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit

            50次

            1~3天

            商品介紹:

            本試劑盒是一種采用Annexin V-Alexa Fluor 488與PI雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。

            細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面,這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內(nèi)轉(zhuǎn)移到細胞膜外,使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂,正常主要存在于細胞膜的內(nèi)面,在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結(jié)合到磷脂類如PS的特性,對PS有高度的親和性。因此,該蛋白可充當(dāng)一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉(zhuǎn)移到細胞膜外不是凋亡所*的,也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的,而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。另外一種活細胞非透過性熒光染料碘化丙啶不能通過完整的活細胞,但能夠?qū)乃篮偷蛲鐾砥诘募毎M行染色, 因此通常將Annexin V與PI配合染色, 以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。

            操作步驟:

            1、細胞樣品的準備:

            a.對于貼壁細胞:小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內(nèi)備用。用胰酶消化細胞,至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時,加入前面收集的細胞培養(yǎng)液,吹打下所有的貼壁細胞,并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內(nèi)。1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞,小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。

            b.對于懸浮細胞:1000×g左右離心3-5分鐘,沉淀細胞。對于特定的細胞,如果細胞沉淀不充分,可以適當(dāng)延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清,可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液,以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,并轉(zhuǎn)移到1.5毫升離心管內(nèi)。再次離心沉淀細胞,小心吸除上清,可以殘留約50μl左右的PBS,以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預(yù)冷的PBS,重懸細胞,再次離心沉淀細胞。

            2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer +12ml 去離子水)。

            3、用 250μl Binding Buffer重新懸浮細胞,調(diào)節(jié)其濃度為 1×106/ml。

            4、取 100μl的細胞懸液于 5ml 流式管中,加入 5μl Annexin V-Alexa Fluor 488 和10μl 20μg/ml的PI溶液。

            5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。

            6、在反應(yīng)管中加 400μl PBS,流式細胞儀(FACS)分析。

            Annexin V-Alexa Fluor 488 PI雙染流式分析圖譜

            Jurkat細胞用順鉑誘導(dǎo)凋亡后用Annexin V-Alexa Fluor 488/PI雙染流式分析圖譜

            儲存條件:2~8℃,避光保存
            實驗報告:

            一、分離與培養(yǎng):

            1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大??;

            2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

            3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

            4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

            5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

            二、免疫熒光鑒定:

            1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

            2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

            3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

            4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

            5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

            6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

            抗內(nèi)皮細胞抗體(AECA)elisa試劑盒英文名稱:AECA ELISA Kit載脂蛋白樣蛋白6抗體包裝5g

            抗利尿激素/血管加壓素/精氨酸加壓素(ADH/VP/AVP)elisa試劑盒英文名稱:ADH/VP/AVP ELISA Kit凋亡相關(guān)蛋白TGFb信號抗體包裝100g

            抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP-5b)elisa試劑盒英文名稱:TRACP-5b ELISA KitA2LD1蛋白抗體包裝25g

            抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRACP5b)elisa試劑盒英文名稱:TRACP5b ELISA Kitα1,4-N-乙酰葡糖轉(zhuǎn)移酶α4Gn-T抗體包裝5g

            抗酒石酸酸性磷酸酶(TRACP)elisa試劑盒英文名稱:TRACP ELISA Kit芳香乙酰脫乙酰基酶抗體包裝10ml

            抗抗體(AsAb)elisa試劑盒英文名稱:AsAb ELISA Kit芳香乙酰脫乙?;笜拥鞍?抗體包裝1g

            抗狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)elisa試劑盒英文名稱:ATGA/TGAB ELISA Kit氨基乙二酸半脫氫酶磷酸泛酰巰基乙轉(zhuǎn)移酶抗體包裝25g

            抗狀腺過氧化物酶抗體(TPO-Ab)elisa試劑盒英文名稱:TPO-Ab ELISA Kit賴氨酸酮戊二酸還原酶抗體包裝5g

            抗肌內(nèi)膜抗體IgA(EMA IgA)elisa試劑盒英文名稱:EMA IgA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)域6抗體包裝25g

            抗環(huán)胍氨酸肽抗體(Anti-CCP-antibody)elisa試劑盒英文名稱:Anti-CCP-antibody ELISA Kit精氨酸酶2抗體包裝5g

            抗紅細胞抗體(RBC)elisa試劑盒英文名稱:RBC ELISA Kit固酮還原酶家族1成員C3抗體包裝1g

            抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)elisa試劑盒英文名稱:gp210 ELISA Kit促腎上腺皮質(zhì)激素受體包裝5g

            抗核抗體(ANA)elisa試劑盒英文名稱:ANA ELISA Kit褐黑素相關(guān)蛋白ART抗體包裝1g

            抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)elisa試劑盒英文名稱:ssDNA ELISA Kit腎上腺皮質(zhì)線粒體鐵氧還蛋白抗體包裝250mg

            抗單核細胞抗體(AMA)elisa試劑盒英文名稱:AMA ELISA KitAllgrove綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝5g

            磷酸化粘附相關(guān)激酶抗體促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)Erlotinib Hydrochloride (CP-358774 Hydrochloride) 抑制 EGFR 激酶的 IC5
            Alexa Fluor 488/PI細胞凋亡檢測試劑盒正磷酸鐵四水物

            其他磷酸高鐵四水物;磷酸鐵四水物

            英文名稱:Ferric phosphate tetrahydrate

            其他英文名稱:Iron(III) phosphate tetrahydrate

            產(chǎn)品規(guī)格:CP,98%

            包裝:250克

            CAS號:31096-47-6

            FePO4•4H2O=222.88

            級別:CP

            含量:≥98.0%

            氯化物:≤0.1%

            砷:≤0.0005%

            重金屬:≤0.01%

            硫酸鹽:≤0.05%

            氯化物:≤0.002%

            其它堿金屬:≤1.0%

            砷:≤0.0005%

            鐵:≤0.005%

            重金屬:≤0.002%

            性狀:結(jié)晶或粉末。無氣味,不吸濕。溶于水,水溶液近中性

            用途:生化研究

            保存:RT

             


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