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詳細介紹
培養(yǎng)操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產(chǎn)品屬于：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
JC-1 Apoptosis Detection Kit | 10T|20T|50T|100T | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒可應用于細胞、組織或純化的線粒體膜電位檢測。大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關，其中線粒體跨膜電位（△?）的破壞，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應過程中最早發(fā)生的事件之一，它發(fā)生在細胞核凋亡特征（染色質濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前，一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉。 本試劑盒采用JC-1(5,5’,6,6’-tetrachloro-1,1’,3,3’-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide)一種陽離子脂質熒光染料作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1有單體和多聚體兩種存在狀態(tài)，在低濃度時以單體的形式存在，高濃度時以多聚體形式存在，兩者的發(fā)射光譜不同，但均可在流式細胞儀綠色（FL-1）通道檢測出綠色熒光，JC-1可透過正常細胞膜以單體狀態(tài)聚集胞內(nèi)，正常健康線粒體的膜電位（△?）具有極性，JC-1依賴于△?的極性被迅速攝入線粒體內(nèi)，并因濃度增高而在線粒體內(nèi)形成多聚體，多聚體發(fā)射光為紅色熒光；可被流式細胞儀的紅色（FL-2）通道檢測到，而細胞發(fā)生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質內(nèi)發(fā)綠色熒光。根椐這一特征檢測線粒體膜電位的變化。 |
注意事項
1. 微量試劑取用前請離心集液。
2. JC-1 避光保存及使用。
3. 細胞培養(yǎng)至匯合度80-90%，收集細胞量在1×106/Test。
4. 對PH 變化過于敏感的細胞建議用胎牛血清取代Buffer 孵育染色及洗滌，或延長觀測時間。
5. 流式細胞儀檢測線粒體膜電位變化受到多種因素的影響，因誘導劑、細胞株類型，作用時間的不同而熒光強度比例都有不同，因此沒有通用標準的補償設門指南，因此每個試驗需設陰性及陽性對照組進行熒光補償及設門。
6. 組織需先制備單細胞懸液或提取純化線粒體后方可進行檢測，可選用我司細胞懸液制備試劑盒或線粒體提取試劑盒。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa試劑盒英文名稱：BMG/β2-MG ELISA Kit白抗原B相關轉錄蛋白5抗體包裝25mg
β2糖蛋白1抗體IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)elisa試劑盒英文名稱：β2-GP1 IgA/G/M ELISA KitBTB/POZ結構域蛋白1（型肝炎病的NS5A反轉錄蛋白8）抗體包裝500mg
α羥基丁脫氫酶(αHBDH)elisa試劑盒英文名稱：αHBDH ELISA KitBCL7B蛋白抗體包裝1g
α葡萄糖苷酶(α-glucosidase)elisa試劑盒英文名稱：α-glucosidase ELISA Kit堿性核蛋白2(鋅指蛋白basonuclin2)抗體包裝250mg
α葡萄糖苷酶(a-Glu)elisa試劑盒英文名稱：a-Glu ELISA KitB白血病/淋巴瘤蛋白7抗體包裝5g
α-黑色素細胞刺激素(α-MSH)elisa試劑盒英文名稱：α-MSH ELISA Kit先天性脂肪代謝障礙蛋白2抗體（常染色體顯性遺傳痙攣性截癱17）包裝1g
α谷胱甘肽S轉移酶(α-GST)elisa試劑盒英文名稱：α-GST ELISA KitB遷移基因1抗體包裝5g
α干擾素(IFN-α)elisa試劑盒英文名稱：IFN-α ELISA Kit脊髓小腦共濟失調(diào)蛋白BEAN1抗體包裝1g
α干擾素(IFNα)elisa試劑盒英文名稱：IFNα ELISA KitB7H6蛋白抗體包裝1g
α甘露糖苷酶(α Manase)elisa試劑盒英文名稱：α Manase ELISA KitB特異性轉錄因子抗體包裝5MG
α半乳糖基抗原(α-Gal)elisa試劑盒英文名稱：α-Gal ELISA Kit橋連整合因子蛋白抗體包裝1g
αN已酰基葡糖苷酶(αNAG)elisa試劑盒英文名稱：αNAG ELISA KitBADH2抗體(稻)包裝25g
αL巖藻糖苷酶(AFU)elisa試劑盒英文名稱：AFU ELISA Kit丁酰膽堿酯酶單克隆抗體包裝5g
αL艾杜糖苷酶(IDUA)elisa試劑盒英文名稱：IDUA ELISA Kit磷化β 連環(huán)素蛋白抗體包裝1g
α2纖溶酶抑制物(α2-PI)elisa試劑盒英文名稱：α2-PI ELISA Kitβ-乳球蛋白抗體包裝25g
磷化內(nèi)收蛋白a1抗體基質衍生因子2樣蛋白1(SDF2L1)KY02111 promotes differentiation of hPSCs to cardiomyocytes by inhibiting Wnt si
細胞凋亡線粒體膜電位檢測試劑盒(JC-1)油紅O
其他1-［2,5-二甲基-4-(2,5-二偶氮)偶氮］-2萘酚；5B；溶劑紅27；紅油O；1-[[4-[(二基)偶氮]二基]偶氮]-2-萘酚
英文名稱：Oil red O
其他英文名稱：Solvent Red 27；1-(2,5-Dimethyl-4-(2,5-dimethylphenylazo)phenylazo)-2-naphthol
產(chǎn)品規(guī)格：高純，75%
包裝：10克/100克/500克
CAS號：1320-06-5
C26H24N4O=408.49
級別：High purity grade
含量：≥75.0%
吸光度試驗Absorbency test：Pass
薄層層析試驗TLC test：Pass
水溶解試驗Solubility (0.1%, Water)：合格
性狀：波爾多紅至暗紅或棕色粉末，溶于水和乙，水溶液呈玫紅色。大吸收波長520(352) nm。有刺激性
用途：生化研究。生物染色，乙纖維素上電泳后的蛋白質帶快速染色。麗春紅S用于對硝纖維素或PVDF膜（Western blots)上的蛋白質進行染色，下面是常用的染色溶液配制：0.1% 麗春紅S (w/v) in 5% acetic acid；2% 麗春紅S (w/v) in 30% TCA；30% sulfosalicylic acid
保存：RT
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