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產品屬于：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
Annexin V-PE/7-AAD Apoptosis Detection Kit | 50次 | 1～3天 |
商品介紹：
本試劑盒是一種采用Annexin-PE與7-AAD雙染法進行細胞早期凋亡分析的檢測試劑盒。 細胞凋亡早期改變發(fā)生在細胞膜表面，這些細胞膜表面的改變之一是磷脂酰絲氨酸(PS)從細胞膜內轉移到細胞膜外，使PS暴露在細胞膜外表面。PS是一種帶負電荷的磷脂，正常主要存在于細胞膜的內面，在細胞發(fā)生凋亡時細胞膜上的這種磷脂分布的不對稱性被破壞而使PS暴露在細胞膜外。Annexin V具有易于結合到磷脂類如PS的特性，對PS有高度的親和性。因此，該蛋白可充當一敏感的探針檢測暴露在細胞膜表面的PS。PS轉移到細胞膜外不是凋亡所*的，也可發(fā)生在細胞壞死中。兩種細胞死亡方式間的差別是在凋亡的初始階段細胞膜是完好的，而細胞壞死在其早期階段細胞膜的完整性就被破壞。7-AAD是一種核酸染料，可進入死細胞內與DNA結合，能夠對壞死和凋亡晚期的細胞進行染色。7-ADD與PI有著相似的熒光特性，但其發(fā)射波譜較PI窄，對其他檢測通道的干擾更小，在多色熒光分析中是PI的最佳替代品，因此通常將Annexin V-PE與ADD配合染色，以區(qū)別凋亡早期細胞與壞死細胞和凋亡的晚期細胞。 |
操作步驟：
1、細胞樣品的準備：
a．對于貼壁細胞：小心收集細胞培養(yǎng)液到一離心管內備用。用胰酶消化細胞，至細胞可以被輕輕用移液管或槍頭吹打下來時，加入前面收集的細胞培養(yǎng)液，吹打下所有的貼壁細胞，并輕輕吹散細胞。再次收集到離心管內。1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞，小心吸除上清。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
b．對于懸浮細胞：1000×g左右離心3-5分鐘，沉淀細胞。對于特定的細胞，如果細胞沉淀不充分，可以適當延長離心時間或稍稍加大離心力。小心吸除上清，可以殘留約50微升左右的培養(yǎng)液，以避免吸走細胞。加入約1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，并轉移到1.5毫升離心管內。再次離心沉淀細胞，小心吸除上清，可以殘留約50μl左右的PBS，以避免吸走細胞。再次加入1ml 4℃預冷的PBS，重懸細胞，再次離心沉淀細胞。
2、用去離子水按1:3稀釋Binding Buffer(4ml Binding Buffer+12ml去離子水)。
3、用250μl Binding Buffer重新懸浮細胞，調節(jié)其濃度為1×106/ml。
4、取 100μl 的細胞懸液于 5ml 流式管中，加入 5μl Annexin V-PE 和 10μl 7-AAD 溶液。
5、混勻后于室溫避光孵育 15 分鐘。
6、在反應管中加400μl PBS，流式細胞儀(FACS)分析。
Jurkat細胞用順鉑誘導凋亡后用Annexin V-PE/7AAD雙染流式分析圖譜
儲存條件：2～8℃，避光保存
培養(yǎng)操作步驟：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
抗促狀腺素受體抗體(TRAb)elisa試劑盒英文名稱：TRAb ELISA Kit腺相關病5 VP1抗體包裝5MG
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抗Smith抗體(Sm)elisa試劑盒英文名稱：Sm ELISA Kit抗利尿激素1A抗體包裝25g
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巨噬細胞炎性蛋白5(MIP-5)elisa試劑盒英文名稱：MIP-5 ELISA Kit脊髓小腦共濟失調10抗體包裝250mg
巨噬細胞炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)elisa試劑盒英文名稱：MIP-3β/ELC/CCL19 ELISA Kit蛋白激酶A錨定蛋白7抗體包裝1g
巨噬細胞炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)elisa試劑盒英文名稱：MIP-3α/CCL20 ELISA Kit腺苷三磷酸結合盒轉運體12抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)elisa試劑盒英文名稱：MIP-2 ELISA Kit腺苷三磷酸結合盒轉運體9抗體包裝25g
巨噬細胞炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)elisa試劑盒英文名稱：MIP-1δ/CCL15 ELISA Kit三磷酸腺苷結合盒轉運蛋白4抗體包裝5g
巨噬細胞炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)elisa試劑盒英文名稱：MIP-1β/CCL4 ELISA Kit肌動蛋白結合蛋白LIM3抗體包裝100g
巨噬細胞炎性蛋白1α(MIP1α)elisa試劑盒英文名稱：MIP1α ELISA Kit高爾基復合體相關蛋白1抗體包裝25g
巨噬細胞來源的趨化因子(MDC/CCL22)elisa試劑盒英文名稱：MDC/CCL22 ELISA Kit乙酰羧化酶1ACCα抗體包裝100mg
巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)elisa試劑盒英文名稱：M-CSF ELISA Kit腺嘌呤核苷酸轉運蛋白1、2、3、4抗體包裝1g
磷酸化蛋白激酶B抗體促腎上腺皮質激素(ACTH)L-685458是一種有效的淀粉樣β蛋白前體γ分泌酶抑制劑, IC50為17 nM,比作用于其他天冬氨酰蛋白酶選擇性高50-100倍。
Annexin V-PE/7-AAD凋亡流式檢測試劑盒正磷酸鐵二水物
其他磷酸高鐵二水物；磷酸鐵二水物；磷酸鐵(Ⅲ)二水物
英文名稱：Ferric phosphate dihydrate
其他英文名稱：Iron(III) phosphate dihydrate
產品規(guī)格：電子級，98%
包裝：25克
CAS號：13463-10-0
FePO4•2H2O=186.85
級別：電子級
總含量：≥98.0%
總鐵（Fe）：≥26.0%
灼燒失重（800℃,1h）：≤32.5%
重金屬：≤20mg/kg
性狀：微透紅色粉末，不溶于水和醋酸，溶于無機酸
用途：生化研究。用作顏料、陶瓷金屬釉色釉料的重要原料，作為鐵鹽強化劑，多用于蛋制品、米制品和糊狀制品
保存：RT
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
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