詳細介紹
產(chǎn)品屬于:
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 發(fā)貨周期 |
50T|100T | 1~3天 |
商品介紹:
細胞凋亡是細胞的基本特征之一,它在機體的胚胎發(fā)育、組織修復、內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定和一些疾病發(fā)生過程等方面起著十分重要的作用。 |
在正常細胞中,磷脂酰絲氨酸(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內(nèi)側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨酸(PS)由脂膜內(nèi)側翻向外側。在體內(nèi),巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除,因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應,而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。
AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發(fā)生在細胞核破裂,DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現(xiàn)之前,這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。
檢測原理:
在正常的活細胞中,磷脂酰絲氨酸(phosphotidylserine,PS)位于細胞膜的內(nèi)側,但在早期凋亡的細胞中,PS 從細胞膜的內(nèi)側翻轉到細胞膜的表面,暴露在細胞外環(huán)境中。
Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨酸與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針,利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發(fā)生。細胞壞死的過程中也會發(fā)生細胞膜損傷,壞死的細胞會結合Annexin V-PE。
Annexin V-PE 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯(lián)合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的,核酸染料7-AAD 不能透過完整的細胞膜,但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞,7-AAD 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現(xiàn)紅色。
7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用,可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區(qū)分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-PE和7-AAD 結合顯色,而7-AAD 則被排除在活細胞(PE陰性)和早期凋亡細胞(PE陽性)之外。在沒有巨噬細胞的情況下,凋亡的后階段會像細胞壞死一樣發(fā)生整個細胞的解體,從而使凋亡晚期的細胞也同時被PE和7-AAD 結合染色呈現(xiàn)雙陽性。
儲存條件:染色液2-8℃避光保存;結合液2-8℃保存;長期不用-20℃保存。
Annexin V-PE染色液避免反復凍融,凍融2次以上可能會失效。長期保存分裝后-20℃保存。
有效期:一年。
培養(yǎng)操作步驟:
1.用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
鹽洛美利英文名稱: Lomefloxacin HCl結合轉化激活因子CITED1抗體包裝10MG
鹽馬尼地平英文名稱: Lomefloxacin HClⅡ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體包裝100mg
鹽美西律(慢心率)英文名稱: Loteprednol EtabonateCSMD2蛋白抗體包裝500mg
鹽尼非卡蘭英文名稱: Loteprednol EtabonateCSMD3蛋白抗體包裝1g
鹽尼卡地平英文名稱: Lovastatin,Monacolin K鈣調神經(jīng)磷CSTP1抗體包裝250mg
鹽普拉格雷英文名稱: Lovastatin,Monacolin KCTAGE6蛋白抗體包裝1g
鹽普魯卡因英文名稱: Lubiprostone皮膚T淋巴瘤相關抗原4抗體包裝1g
鹽曲美他英文名稱: Lypressin Acetate膜蛋白CLDND2抗體包裝25g
鹽索他洛爾英文名稱: Matrixyl Acetate含半胱和組豐富域蛋白1抗體包裝5g
鹽特拉唑英文名稱: Meclofenoxate HCl豬圓環(huán)?、蛐鸵職さ鞍装b5g
鹽替羅非班英文名稱: Meclofenoxate HCl抗菌肽CAMP抗體包裝1g
鹽維拉帕米英文名稱: Megestrol Acetate卷曲螺旋結構域蛋白134抗體包裝5g
依那普利拉英文名稱: Megestrol Acetate卷曲螺旋結構域蛋白69抗體包裝1g
依普利酮英文名稱: Melanotan ⅡAcetate卷曲螺旋結構域蛋白98抗體包裝5g
*貝特英文名稱: Meloxicam卷曲螺旋結構域蛋白70抗體包裝1g
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質量規(guī)格:>98%,BR循環(huán)免疫復合物試劑盒鹽藥根堿;Jatrorrhizine
黃曲霉Aspergillus│flavus 質量規(guī)格:>98%血影蛋白試劑盒銀杏內(nèi)酯C;Ginkgolide C
細腳擬青霉Paecilomyces tenuipes 質量規(guī)格:>98%,標準品血血小板衍生生長因子可溶性受體α試劑盒葉;Folic acid
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒氧化鐵
其他 三氧化二鐵;紅色氧化鐵;氧化高鐵;205鐵紅;磁性氧化鐵紅;燒褐鐵礦;鐵丹;紅粉;威尼斯紅
英文名稱: Iron(III)oxide
其他英文名稱: Ferric oxide;Iron oxide red;Red iron trioxide
產(chǎn)品規(guī)格: 4N
包裝:10克
產(chǎn)品規(guī)格: AR,99%
包裝:500克
CAS號:1309-37-1
Fe2O3=159.69
級別:4N
含量:≥99.99%
級別:AR
含量:≥99.0%
鹽不溶物:≤0.02%
重金屬(以Cu計):≤0.01%
水溶物:≤0.1%
硫化銨不沉淀物:≤0.2%
總氮量:≤0.005%
硫鹽:≤0.08%
性狀:紫棕色粉末。溶于,不溶于水。相對密度5.12~5.24。熔點1565℃。小致死量(狗,皮下)30mG/kG。有刺激性
用途:生化研究。分析試劑。催化劑。拋光劑。顏料配制。玻璃濾片(綠色)著色。鐵氧體
保存:RT
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。