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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | A01X1409 | 主要用途 | 僅供科研實(shí)驗(yàn) |
| 組織來(lái)源 | 患類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)滑膜組織 | 種屬來(lái)源 | 人 |
詳細(xì)介紹
組織來(lái)源：患類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病人的關(guān)節(jié)滑膜組織
種屬來(lái)源：人
細(xì)胞簡(jiǎn)介：滑膜是關(guān)節(jié)囊的內(nèi)層，淡紅色， 平滑閃光，薄而柔潤(rùn)，由疏松結(jié)締組織組成。關(guān) 節(jié)腔內(nèi)的所有結(jié)構(gòu)， 除關(guān)節(jié)軟骨、半月軟骨板以外,即便是通過(guò)關(guān)節(jié)腔的肌腱、韌 帶等均全部為滑膜所包裹?；し置诨海陉P(guān)節(jié)活動(dòng)中起重要作用。正?；? 分為兩層， 即薄的細(xì)胞層(內(nèi)腔層)和血管層(內(nèi)膜下層)，是血管豐富的關(guān)節(jié)囊內(nèi)膜 ，貼附于非關(guān)節(jié)面部分， 覆蓋于關(guān)節(jié)囊內(nèi)的骨面上，不在軟骨面上，此部分稱(chēng)為 邊緣區(qū)或“裸區(qū)"。滑膜呈粉紅色， 光滑發(fā)亮、濕而潤(rùn)滑，有時(shí)可見(jiàn)絨毛， 內(nèi)含 膠原性纖維?；ぜ?xì)胞有A、 B兩型。巨噬細(xì)胞樣A型細(xì)胞，表面有絲狀偽足、漿 膜內(nèi)陷、囊泡、線粒體、溶酶體、胞漿纖維和高爾基體， 具有吞噬功能； B型成纖 維樣滑膜細(xì)胞(FLS) ，有高濃度的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結(jié)構(gòu)， 是介導(dǎo) RA 關(guān)節(jié)破壞的主要細(xì)胞。
培養(yǎng)基：原代成纖維細(xì)胞培養(yǎng)體系
換液頻率:每2-3天換液一次
生長(zhǎng)特性：貼壁培養(yǎng)
細(xì)胞形態(tài)：成纖維樣細(xì)胞
傳代特性：細(xì)胞特性確定傳代
消化液：0.25%胰dan白酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
一、細(xì)胞基本屬性
產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品規(guī)格 | 商品貨號(hào) |
人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | A01X1409 |
二、細(xì)胞培養(yǎng)狀態(tài)
發(fā)貨時(shí)發(fā)送細(xì)胞電子版照片
三、使用方法
人類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞是一種貼壁培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞形態(tài)呈成纖維樣細(xì)胞，在技術(shù)部標(biāo)準(zhǔn)操作流程下，細(xì)胞可傳2-3代；建議您收到細(xì)胞后盡快進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)。
客戶(hù)收到細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作。
1. 取出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。
2. 貼壁細(xì)胞消化
1)吸出T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細(xì)胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補(bǔ)充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細(xì)胞收貨脫落
1)收集所有細(xì)胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)；
4)待細(xì)胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶?jī)?nèi)貼壁細(xì)胞按正常消化處理。
4. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)
因原代細(xì)胞貼壁特殊性，貼壁的原代細(xì)胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實(shí)驗(yàn)器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時(shí)，需要對(duì)實(shí)驗(yàn)器皿進(jìn)行包被，以增強(qiáng)細(xì)胞貼壁性，避免細(xì)胞因沒(méi)貼好影響實(shí)驗(yàn)；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴(lài)氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定。懸浮/半懸浮細(xì)胞無(wú)需包被。
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四、注意事項(xiàng)
1. 培養(yǎng)基于4℃條件下可保存3-6個(gè)月。
2. 在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，請(qǐng)注意保持無(wú)菌操作。
3. 傳代培養(yǎng)過(guò)程中，消化時(shí)間不宜過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)影響細(xì)胞貼壁及其生長(zhǎng)狀態(tài)。
4. 建議客戶(hù)收到細(xì)胞后前3天每個(gè)倍數(shù)各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和技術(shù)部溝通；由于運(yùn)輸?shù)脑颍瑐€(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，詳盡告知細(xì)胞的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤、回訪直至問(wèn)題得到解決。
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