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1、合適的細胞培養(yǎng)基
合適的細胞培養(yǎng)基是體外細胞生長增殖的重要的條件之一，培養(yǎng)基不僅提供細胞營養(yǎng)和促使細胞生長增殖的基礎(chǔ)物質(zhì)，而且還提供培養(yǎng)細胞生長和繁殖的生存環(huán)境。
2、血清
目前，大多數(shù)合成培養(yǎng)基都需要添加血清。血清是細胞培養(yǎng)液中重要的成分之一，含有細胞生長所需的多種生長因子及其它營養(yǎng)成分。
3、無菌無毒細胞培養(yǎng)環(huán)境
無菌無毒的操作環(huán)境和培養(yǎng)環(huán)境是保證細胞在體外培養(yǎng)成功的首要條件。
在體外培養(yǎng)的細胞由于缺乏對微生物和有毒物的防御能力，一旦被微生物或有毒物質(zhì)污染，或者自身代謝物質(zhì)積累，可導(dǎo)致細胞中毒死亡。因此，在體外培養(yǎng)細胞時，必須保持細胞生存環(huán)境無菌無毒，及時清除細胞代謝產(chǎn)物。
4、恒定的細胞生長溫度
維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度。不同種類的細胞對培養(yǎng)溫度要求也不同，人體細胞培養(yǎng)的標準溫度為36。5℃±0。5℃，偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。
培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在39-40℃1小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在40-41℃1小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；41-42℃1小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1小時，細胞全部死亡。
相反，溫度不低于0℃時，對細胞代謝雖有影響，但并無傷害作用；把細胞放入25-35℃時，細胞仍能生存和生長，但速度減慢；放在4℃數(shù)小時后，再回到37℃培養(yǎng)，細胞仍能繼續(xù)生長。細胞代謝隨溫度降低而減慢。當(dāng)溫度降至冰點以下時，細胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。
但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護劑（二甲亞砜或甘油），可在深低溫下如-80℃或-196℃（液氮）長期保存。
5、合適的氣體環(huán)境
氣體是哺乳動物細胞培養(yǎng)生存必需條件之一，所需氣體主要有氧氣和二氧化碳。