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ATCC細(xì)胞分類檢測步驟
閱讀：306 發(fā)布時(shí)間：2021-3-5ATCC細(xì)胞檢測步驟：
【 樣本儲存 】：收集標(biāo)本前必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天進(jìn)行檢測的標(biāo)本，儲存在4℃?zhèn)溆?，如有特殊原因需要周期收集?biāo)本，將標(biāo)本及時(shí)分裝后放在-20℃或-70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。標(biāo)本2-8℃可保存48小時(shí)，-20℃可保存1個(gè)月。-70℃可保存6個(gè)月。部分激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。
【試劑盒成分】：人、綿羊、小鼠、大鼠、豬、兔、山羊、牛、馬、豬；植物細(xì)胞因子、骨代謝、細(xì)胞凋亡、激素內(nèi)分泌、活性多肽、肝纖維化、自身抗體科研Elisa檢測試劑盒。 主要用于科研方面，不用于臨床診斷。可以用于檢測各種指標(biāo)。
ATCC細(xì)胞操作方法：
（1）取成年新西蘭大白兔，耳緣靜脈注射空氣處死后，取下兔子的雙腿，立即用75%乙醇浸泡。
（2）移入細(xì)胞房內(nèi)，去除雙腿表面的皮毛及肌肉，剪取關(guān)節(jié)段，移至超菌工作臺內(nèi)。
（3）PBS洗滌數(shù)次，用手術(shù)刀或彎剪將關(guān)節(jié)表面的軟骨組織取下。
（4）軟骨組織塊靜置5min，棄去上層液體及懸浮組織，將軟骨組織剪成1mm3的大小。移到離心管中加3倍體積的0.25%胰蛋白酶，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化15-20min；
（5） 4℃靜置5min；棄上清，PBS洗滌，去上清。加入0.2%膠原酶II，置入37℃的恒溫?fù)u床中，振蕩消化2H；
（6）加入生長培養(yǎng)基終止消化，反復(fù)吹打后依次通過200目濾網(wǎng)。收集濾液,1200rpm離心8min，棄上清，用DMEM*培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞, 放入37℃，5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
（7）細(xì)胞傳代后放入預(yù)置有薄骨片或蓋玻片的培養(yǎng)板中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞*展開后即可固定做原代鑒定。