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不同實(shí)驗(yàn)對(duì)抗體有什么要求
閱讀：465 發(fā)布時(shí)間：2021-10-26科研工作離不開抗體，WB、IP、IHC、IF、ChIP和FC都需要用到抗體，那么這幾種實(shí)驗(yàn)技術(shù)都需要什么樣的抗體呢？
1.WB
WB的蛋白經(jīng)過加熱變性之后都變成線性的結(jié)構(gòu)。因此*好的抗體是采用非常特異序列的人工合成多肽的方法來做實(shí)驗(yàn)，結(jié)果也非常特異。
2.IP/CHIP
我們用抗體去結(jié)合生理狀態(tài)下的蛋白質(zhì)，因此IP的抗體最好使用純化的天然蛋白制作的抗體來做，也可以用純化的重組蛋白的抗體。最好不要用人工合成多肽制作的抗體，因?yàn)檫@種抗體識(shí)別的位點(diǎn)可能被深深地藏在了蛋白的內(nèi)心深處。CHIP和IP沒有太大的區(qū)別，唯 yi 的問題在于，如果抗體識(shí)別的表位和該蛋白質(zhì)與DNA結(jié)合的部位一致，則會(huì)導(dǎo)致CHIP實(shí)驗(yàn)的失敗。
3. IF/IHC
免疫熒光和免疫組化中需要進(jìn)行固定一步，固定是為了盡量讓細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)維持和原有的一致。這種化學(xué)物質(zhì)的固定使蛋白質(zhì)變性凝固，與天然狀態(tài)下的蛋白質(zhì)有了一定的區(qū)別，但是又不同WB中加熱變性變成了線性的結(jié)構(gòu)。因此在做IF/IHC實(shí)驗(yàn)中，最合適的抗體可以是純化的重組蛋白得到的抗體，也可以是人工合成多肽得到的抗體（多肽是在蛋白質(zhì)的表面）
4.FC
流式細(xì)胞中分為兩種，一種是活細(xì)胞的流式，這種流失最好采用是天然蛋白或者重組蛋白的抗體來做，另外一種是經(jīng)過固定之后的流式，和IF/IHC 所用抗體一致。 在做流式細(xì)胞中，我們有直接標(biāo)記和間接標(biāo)記，間接標(biāo)記不如直接標(biāo)記真實(shí)準(zhǔn)確。因此我們選擇流式抗體要采用帶有熒光標(biāo)記的抗體；如果研究的蛋白沒有直接標(biāo)記的抗體，那么就采用間接標(biāo)記抗體，需要添加熒光二抗。