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            技術文章

            原代細胞培養(yǎng)基本流程

            閱讀:137          發(fā)布時間:2024-5-27

                   原代細胞可用來轉染siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以內的小分子 RNA 和 DNA,可轉染絕大多數原代細胞。目前,無論國外還是國內,原代細胞的核酸轉染都是個熱點難題,市場還缺乏真正有效的商品化的原代細胞核酸轉染試劑。原代細胞能夠高效轉染絕大多數原代細胞,獲得比較理想的基因敲除效果。甚至對一些活體寄生蟲幼蟲,也能獲得較為理想的轉染結果。對于大多數原代細胞,RFect PM 細胞轉染陽性率都在 80%以上,而轉染細胞死亡率不到 10%。

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            原代細胞培養(yǎng)基本流程:

            1、器官和組織的選擇

            盡可能的去除不必要的組織和血跡。


            2、原代細胞的分離

            (1)應用PriCells原代細胞分離試劑盒I、II、III。

            (2)根據組織來源不同,可選用不同的PriCells原代細胞分離試劑盒。


            3、原代細胞的培養(yǎng):

            (1)PriCells原代細胞特制培養(yǎng)基

            (2)PriCells原代細胞特制添加物

            (3)優(yōu)質胎牛血清


            4、細胞的培養(yǎng)和鑒定:

            PriCells原代細胞鑒定試劑盒


            4、原代細胞的傳代、保存

            (1)傳代:依椐細胞的生長狀態(tài),生長的細胞1:2或1:3進行傳代。

            (2)保存:DMSO+培養(yǎng)液+血清

            按下列順序降溫:室溫→4℃(20分鐘)→冰箱冷凍室(30分鐘)→超低溫冰箱(-80℃過夜)→液氮。


            5、原代細胞的復蘇

            (1)取出細胞,迅速放入37℃溫水中快速解凍。

            (2)吸出細胞懸液,并加10倍以上培養(yǎng)液。

            (3)用培養(yǎng)液適當稀釋后接種培養(yǎng)瓶,放入37℃CO2培養(yǎng)箱靜置培養(yǎng)。



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