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大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟
閱讀：106 發(fā)布時間：2018-9-26| 提 供 商 | 上海邦景實業(yè)有限公司 | 資料大小 | 33.3KB |
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大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。
80pmol/L
5號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
40pmol/L
4號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的5號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
20pmol/L
3號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的4號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
10pmol/L
2號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的3號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
5pmol/L
1號標(biāo)準(zhǔn)品
150μl的2號標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。
11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）酶聯(lián)免疫試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關(guān)液體樣本中信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）含量。檢測范圍：3pmol/L-80pmol/L。大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）Elisa試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中小鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）水平。用純化的大鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7），再與HRP標(biāo)記的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中小鼠信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子7（Smad7）濃度。