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肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作說(shuō)明
閱讀：138 發(fā)布時(shí)間：2019-10-23| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 6.2KB |
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肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作說(shuō)明
秋天，葉子一片片落下，帶著一絲絲的遺憾,投向大地母親的懷抱，她們跳躍著、旋轉(zhuǎn)著、輕舞飛揚(yáng)著翩然落下。接下來(lái)介紹 肝竇內(nèi)皮細(xì)胞*培養(yǎng)基操作說(shuō)明
操作規(guī)程：
培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。