化工儀器網(wǎng)
資料下載
新型抑癌基因抗體操作說(shuō)明
閱讀：148 發(fā)布時(shí)間：2019-12-18| 提 供 商 | 上海邦景實(shí)業(yè)有限公司 | 資料大小 | 72.8KB |
|---|---|---|---|
| 資料圖片 | 查看 | 下載次數(shù) | 76次 |
| 資料類型 | WINZIP 壓縮文檔 | 瀏覽次數(shù) | 148次 |
| 免費(fèi)下載 | 點(diǎn)擊下載 |
新型抑癌基因抗體操作說(shuō)明
在這洋人的節(jié)日里，好想和你在一起，享受這醉人的氣氛，然而你我分割兩地，我只好在這輕聲地對(duì)你說(shuō):“親愛(ài)的，圣誕快樂(lè)!”接下來(lái)介紹 新型抑癌基因抗體操作說(shuō)明
實(shí)驗(yàn)要點(diǎn)：
1.如在反應(yīng)混合液中有疊氮鈉或游離氨基存在,會(huì)抑制標(biāo)記反應(yīng)。因此,蛋白質(zhì)在反應(yīng)前要對(duì) 0.1mol/L碳酸氫鈉緩沖液或0.5mol/L硼酸緩沖液充分透析；
2.所用的NHSB及待生物素化蛋白質(zhì)之間的分子比按蛋白質(zhì)表面的ε-氨基的密度會(huì)有所不同,選擇不當(dāng)則影響標(biāo)記的效率,應(yīng)先用幾個(gè)不同的分子比來(lái)篩選適條件；
3.用NHSB量過(guò)量也是不利的,抗原的結(jié)合位點(diǎn)可能因此被封閉,導(dǎo)致抗體失活；
4.由于抗體的氨基不易接近可能造成生物素化不足,此時(shí)可加入去污劑如 Triton x-100, Tween20等；
5.當(dāng)游離ε-氨基(賴氨酸殘基的氨基)存在于抗體的抗原結(jié)合位點(diǎn)時(shí),或位于酶的催化位點(diǎn)時(shí),生物素化會(huì)降低或損傷抗體蛋白的結(jié)合力或活性；
6.生物素還可能與不同的功能基團(tuán),如羰基、氨基、巰基、異咪唑基及苯酚基,也可與糖基共價(jià)結(jié)合；
7.交聯(lián)反應(yīng)后,應(yīng)充分透析,否則,殘余的生物素會(huì)對(duì)生物素化抗體與親和素的結(jié)合產(chǎn)生競(jìng)爭(zhēng)作用；
8.在細(xì)胞的熒光標(biāo)記實(shí)驗(yàn)中,中和親和素的本底低,但由于鏈霉親和素含有少量正電荷,故對(duì)某些細(xì)胞可導(dǎo)致高本底。