Coronavirus（CoV）科研染料法熒光定量通用RT-PCR試劑盒注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

原理:
所謂實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。
檢測方法
1.SYBRGreenⅠ法：
在PCR反應(yīng)體系中，加入過量SYBR熒光染料，SYBR熒光染料特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后，發(fā)射熒光信號(hào)，而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會(huì)發(fā)射任何熒光信號(hào)，從而保證熒光信號(hào)的增加與PCR產(chǎn)物的增加*同步。
SYBR定量PCR擴(kuò)增熒光曲線圖
PCR產(chǎn)物熔解曲線圖
2.TaqMan探針法：
探針完整時(shí)，報(bào)告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號(hào)被淬滅基團(tuán)吸收；PCR擴(kuò)增時(shí)，Taq酶的5’-3’外切酶活性將探針酶切降解，使報(bào)告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號(hào)，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個(gè)熒光分子形成，實(shí)現(xiàn)了熒光信號(hào)的累積與PCR產(chǎn)物的形成*同步。

產(chǎn)品名稱科研	染料法熒光定量通用RT-PCR試劑盒
英文名稱	Coronavirus（CoV）
編號(hào)	BJP3160

通用原則：
1，科研染料法熒光定量通用RT-PCR試劑盒先選擇好探針，然后設(shè)計(jì)引物使其盡可能的靠近于探針。
2， 擴(kuò)增子的長度應(yīng)不超過400bp，理想的能在100－150bp內(nèi)，擴(kuò)增片斷約短，有效的擴(kuò)增反應(yīng)就越容易獲得。較短的擴(kuò)增片斷也容易保證分析的一致性
3， 保持GC含量在20％和80％之間，GC富含區(qū)容易產(chǎn)生非特異反應(yīng)，從而會(huì)導(dǎo)致擴(kuò)增效率的降低，及在SG分析中非特異信號(hào)。
4， 為了保證效率和重復(fù)性，應(yīng)避免重復(fù)的核苷酸序列，尤其是G（不能有4個(gè)連續(xù)的G）
5， 將引物和探針互相進(jìn)行配對(duì)檢測，以避免二聚體和發(fā)卡結(jié)構(gòu)的形成。
b），探針設(shè)計(jì)指導(dǎo)
1，在設(shè)計(jì)引物之前設(shè)計(jì)探針
2，探針的Tm值應(yīng)在68－70℃之間，如果是目測探針，則要仔細(xì)審查GC富含區(qū)。
3，探針的5’端要避免有鳥氨酸，5’G會(huì)有淬滅作用，即使被切割下來這種淬滅作用也還會(huì)存在
4，選擇C多于G的鏈作探針，G的含量多于C會(huì)降低反應(yīng)效率，這時(shí)就應(yīng)選擇配對(duì)的另一條鏈作為探針。
6， 探針應(yīng)盡可能的短，不要超過30個(gè)bp。
7， 檢測探針的DNA折疊和二級(jí)結(jié)構(gòu)。
服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單，提供待檢基因相關(guān)信息；
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同，支付預(yù)付款（30-50%)；
3.設(shè)計(jì)合成定量PCR引物（或客戶提供文獻(xiàn)引物委托本公司合成）；
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄；
5.PCR預(yù)實(shí)驗(yàn)，主要檢測引物的特異性和擴(kuò)增效率；
6.正式定量實(shí)驗(yàn)：對(duì)所有樣品上機(jī)檢測；
7.實(shí)驗(yàn)結(jié)果和數(shù)據(jù)分析，形成報(bào)告。

以下是公司*產(chǎn)品：

鹽酸頭孢替安標(biāo)準(zhǔn)品二三胺五酸

頭孢烯相關(guān)雜質(zhì)H標(biāo)準(zhǔn)品二三胺五酸

頭孢泊肟酯標(biāo)準(zhǔn)品Cholinechloride 氯化膽堿

頭孢烯相關(guān)雜質(zhì)k標(biāo)準(zhǔn)品Cholinechloride 氯化膽堿

頭孢烯（E）-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品DMSO 二基亞砜  AR99.9%   降價(jià)

頭孢烯（Z）-異構(gòu)體標(biāo)準(zhǔn)品DMSO 二基亞砜  AR99.9%   降價(jià)

頭孢烯DMSO 二基亞砜 Sigma 99.9%  降價(jià)

頭孢噻夫鈉標(biāo)準(zhǔn)品DMSO 二基亞砜 Sigma 99.9%  降價(jià)

頭孢西標(biāo)準(zhǔn)品DMSO二基亞砜（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)）  Applichem

頭孢匹胺標(biāo)準(zhǔn)品DMSO二基亞砜（細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)） Applichem多庫脂鈉標(biāo)準(zhǔn)品Mifepristone  米非司酮

多庫酯鈉相關(guān)物質(zhì)B標(biāo)準(zhǔn)品Bafilomycin A1 from Streptomyces griseus 巴弗洛A1

 

1,2-二(2-基己基氧碳基)烷磺酸鉀標(biāo)準(zhǔn)品

 

2,6-二氯靛酚

多非利特標(biāo)準(zhǔn)品孕馬血清促性腺激素（PMSG）

多非利特相關(guān)物質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品L-Citrulline DL-Malate 2:1 L-瓜氨酸-DL-蘋果酸(2:1)

磺酸多拉司瓊標(biāo)準(zhǔn)品L-Citrulline DL-Malate 1:1 L-瓜氨酸-DL-蘋果酸(1:1)

磺酸多拉司瓊相關(guān)雜質(zhì)A標(biāo)準(zhǔn)品Disuccinimidyl Suberate 雙琥珀酰亞胺辛二酸酯

鹽酸多奈哌齊標(biāo)準(zhǔn)品DL-Lysine monohydrochloride DL-賴氨酸鹽酸鹽

多奈哌齊A標(biāo)準(zhǔn)品Potassium DL-Aspartate DL-天門冬氨酸鉀

鹽酸多沙普侖標(biāo)準(zhǔn)品N-Hippuryl-His-Leu hydrate 馬尿酰-組氨酰-亮氨酸  98%

產(chǎn)品特點(diǎn)：

    全新的熱啟動(dòng)DNA聚合酶-Hot Start Taq DNA聚合酶，可在PCR反應(yīng)的過程中抑制非特異擴(kuò)增，從而最大限度地減少非特異性擴(kuò)增產(chǎn)物的產(chǎn)生，提高熒光定量PCR反應(yīng)的特異性；
    采用新型的熒光染料EvaGreen，與傳統(tǒng)熒光染料相比，對(duì)PCR反應(yīng)抑制更小，而且熒光信號(hào)更強(qiáng)，檢測靈敏度更高；
    含有UNG的試劑盒可以防止PCR產(chǎn)物污染體系，進(jìn)而有效防止實(shí)驗(yàn)過程中PCR產(chǎn)物的交叉污染；
TaqMan熒光定量PCR試劑盒提供了除引物、探針、模板外的所有實(shí)驗(yàn)所需組分，并配備2×Buffer，可完成不同類型熒光探針的實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)，方便用戶使用；
    試劑盒的通用性強(qiáng)，可適用于Roche的Light Cycler、ABI各型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀和。