高效液相色譜儀流動相的選用要求包括流動相性質(zhì)要求、流動相選擇、流動相pH值、流動相脫氣、流動相過濾、流動相貯存、鹵代溶劑應(yīng)特別注意的問題和HPLC用水等方面。
流動相性質(zhì)要求：
HPLC中，強(qiáng)溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附減少，相應(yīng)的容量因子k值減??；較弱的溶劑使溶質(zhì)在填料表面的吸附增加，相應(yīng)的容量因子k值增大。因此，k值是流動相組成的函數(shù)。理論塔板數(shù)一般與流動相的粘度成反比。
1、流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)：低交聯(lián)度的離子交換樹脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機(jī)相會溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。
堿性流動相不能用于硅膠柱系統(tǒng)。
酸性流動相不能用于氧化鋁和氧化鎂等吸附劑的柱系統(tǒng)。
2、純度高：色譜柱的壽命與大量流動相通過有關(guān)，特別是當(dāng)溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。
3、必須與檢測器匹配：當(dāng)使用UVD時(shí)，所用流動相在檢測波長下應(yīng)沒有吸收或吸收很小。
當(dāng)使用RID時(shí)，應(yīng)選擇折光系數(shù)與樣品差別較大的溶劑作流動相，以提高靈敏度。
4、粘度低：高粘度溶劑會影響溶質(zhì)的擴(kuò)散和傳質(zhì)，使柱效降低，還會使柱壓增加，分離時(shí)間延長。選擇沸點(diǎn)在100℃以下的流動相。
5、對樣品的溶解度要適宜：如果溶解度欠佳，樣品會在色譜柱內(nèi)沉淀，不但影響純化分離，而且會使色譜柱惡化。
6、樣品易于回收：應(yīng)選用揮發(fā)性溶劑。
流動相選擇：
HPLC中，溶劑的洗脫能力與溶劑極性相關(guān)。
1、正相色譜的流動相：
在正相色譜中，溶劑強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而增加；
正相色譜的流動相通常采用烷烴加適量極性調(diào)整劑。
2、反相色譜的流動相：
在反相色譜中，溶劑強(qiáng)度隨極性的增強(qiáng)而減弱；
反相色譜的流動相通常以水作基礎(chǔ)溶劑，再加入一定量的能與水互溶的極性調(diào)整劑。極性調(diào)整劑的性質(zhì)及所占比例對溶質(zhì)的保留值和分離選擇性有顯著影響。一般情況下，甲醇－水系統(tǒng)滿足多數(shù)樣品的分離要求，且流動相粘度小，價(jià)格低，是反相色譜常用的流動相；
乙腈－水系統(tǒng)與甲醇－水系統(tǒng)相比，乙腈的溶劑強(qiáng)度較高且粘度較小，可滿足在紫外185～205nm處檢測的要求，綜合來看，乙腈－水系統(tǒng)優(yōu)于甲醇－水系統(tǒng)；
在分離含極性差別較大的多組分樣品時(shí)，為了使各組分均有合適的k值并分離良好，需采用梯度洗脫。
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