根據(jù)被分離組分和固定液分子間的相互作用關(guān)系，色譜柱固定液的選擇一般根據(jù)所謂的“相似性原則”。即固定液的性質(zhì)與被分離組分之間的某些相似性，如官能團(tuán)、化學(xué)鍵、極性、某些化學(xué)性質(zhì)等，性質(zhì)相似時(shí)，兩種分子間的作用力就強(qiáng)，被分離組分在固定液中的溶解度就大，分配系數(shù)大，因而保留時(shí)間就長(zhǎng);反之溶解度小，分配系數(shù)小，因而能很快流出色譜柱。
一般分為以下幾種情況，
1、分離極性化合物，采用極性固定液
這時(shí)樣品各組分與固定液分子間作用力主要是定向力和誘導(dǎo)力，各組分出峰次序按極性順序，極性小的先出峰，極性越大，出峰越慢。
2、分離非極性化合物，應(yīng)用非極性固定液
樣品各組分與固定液分子間作用力是色散力，沒(méi)有特殊選擇性，這時(shí)各組分按沸點(diǎn)順序出峰，沸點(diǎn)低的先出峰。對(duì)于沸點(diǎn)相近的異構(gòu)物的分離，效率很低。
3、分離非極性和極性化合物的混合物時(shí)，
可用極性固定液，這時(shí)非極性組分先餾出，固定液極性越強(qiáng)，非極性組分越易流出。
4、對(duì)于能形成氫鍵的樣品。
如醇、酚、胺和水的分離，一般選擇極性或氫鍵型的固定液，這時(shí)依組分和固定液分子間形成氫鍵能力大小進(jìn)行分離。
“相似相容性原則”是選擇固定液的一般原則。
有時(shí)利用現(xiàn)有的固定液不能達(dá)到滿意的分離結(jié)果時(shí)，往往采用“混合固定液”，應(yīng)用兩種或兩種以上性質(zhì)各不相同的，按適合比例混合的固定液，使色譜柱分離有比較滿意的選擇性，又不致使分析時(shí)間延長(zhǎng)。
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