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            技術文章

            水溶Cy5 NHS,146368-14-1,鏈接多肽抗體熒光染料

            閱讀:736          發(fā)布時間:2018-7-25

            水溶Cy5 NHS,146368-14-1,鏈接多肽抗體熒光染料

            水溶Cyanine 5琥珀酰亞胺酯(succinimidyl ester(SE)),類似于Cy5® NHS ester,不需要有機溶劑即在水相中即可對各種帶氨基分子進行標記。因此該產(chǎn)品尤其適用于對那些在有機溶劑中易變性的蛋白和低溶解度蛋白的標記。

            Sulfo-Cyanine 5是Cy5®的衍生物,與很多儀器如讀板機(plate readers),顯微鏡和成像設備等相兼容。是受歡迎的熒光染料之一。

             該染料是高度親水的、水溶的。非磺化的衍生物:Cyanine 5 NHS ester。

            可以在所有的應用中替代Cy5®,Alexa Fluor 647和DyLight 649。

            一般特性

             外觀:

            dark blue powder

            分子量:

            761.84

            分子式:

            C36H40N3NaO10S2

            溶解性:

            very good in water, good in DMF and DMSO

            質(zhì)量控制:

            NMR 1H (95%) and 13C, TLC, functional testing

            儲存條件:

            Storage: 24 months after receival at -20°C in the dark. Transportation: at room temperature for up to 3 weeks. Avoid prolonged exposure to light. Desiccate.

             

            光譜特性

            大激發(fā)波長, nm:

            646

            在大激發(fā)波長下的消光系數(shù), Lmol-1cm-1:

            271000

            大發(fā)生波長, nm:

            662

            熒光量子產(chǎn)率:

            0.2

            CF260:

            0.13

            CF280:

            0.13

             

            供應商:陜西新研博美生物科技有限公司

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            Cyanine5 NHS ester和標記 (D-ser2)-leucineenkephalin的連接實驗方法和步驟

            【準備材料】:

            Cy5 NHS ester purchased from xi an ruixibio

            (D-ser2)-leucineenkephalin purchased fromsigma

            【實驗步驟】:

            1.      Cy5 NHS 1.0 mg 溶解于400 μL DMSO后,加入到1mL 的玻璃瓶中盛有(D-ser2)-leucine-enkephalinacetate(YSGFLT, 0.75 mg) 的400 μL DMSO溶液。(Dye 和peptide 投料比是 1:1)

            2.      然后加入15 μL三乙胺,常溫避光攪拌反應混合物過夜。

            3.      用HPLC 純化蛋白,使用蛋白C18柱子(25 cm×10 mm),每次上樣注入2×400 μL,30分鐘梯度洗脫從0.1% TFA水溶液到MeCN∶H2O(0.1% TFA)=70∶30,流速4mL /min。(對不同的蛋白選擇不同的合適HPLC梯度流動相)

            4.      收集適當?shù)纳珟Х澹瑯擞浂嚯牡谋A魰r間比未標記的多肽長。

            5.      產(chǎn)品冷凍干燥成粉末或在水溶液中,-20℃避光儲存;必要時可用質(zhì)譜表征。

            6.      CyDye標記的蛋白穩(wěn)定性取決于蛋白本身。例如標記的IgG在4 ℃可避光保存2月;更長期的保存需加入等體積的甘油-20 ℃避光保存.

            F/P計算:

            Cy5 在650 nm 的摩爾吸光系數(shù)為250 000 M-1 cm-1 ,所用蛋白在280 nm處的摩爾吸光系數(shù)為 170

            000 M-1 cm-1;Cy5在280nm處的吸收是650nm處的5%。按以下公式計算F/P值。

            [Cy5 dye] = (A650)/250 000

            [peptide] =[A280 -(0.05×A650)]/170 000

            F/P final= [dye]/[peptide]= {0.68×A650}/{A280 - (0.05×A650)}

            N-羥基琥珀酰亞胺脂Dye NHS esters

            Pyrenebutyric acid NHS ester

            ROX NHS ester, pure 6- isomer

            BDP FL NHS ester

            FAM NHS ester

            Cyanine3 NHS ester

            Cyanine3.5 NHS ester

            Cyanine5 NHS ester

            Cyanine5.5 NHS ester

            Cyanine7 NHS ester

            Cyanine7.5 NHS ester

            Sulfo-Cyanine3 NHS ester

            Sulfo-Cyanine5 NHS ester

            sulfo-Cyanine5 bis-NHS ester

            Sulfo-Cyanine7 NHS ester

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