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SBFI AM ( Na+ Indicator) 鈉離子指示探針特性
閱讀：400 發(fā)布時(shí)間：2022-8-10SBFI AM ( Na+ Indicator) 鈉離子指示探針
一、產(chǎn)品描述
SBFI，英文全名Sodium-binding Benzofuran Isophthalate，一種Na+選擇性熒光指示劑，可用來預(yù)測(cè)純化線粒體Na+梯度，檢測(cè)胞內(nèi)Na +水平，測(cè)定細(xì)胞Na+外流，以及與其他熒光指示劑聯(lián)合使用以分析Na+與Ca2+和Mg2+濃度、胞內(nèi)pH和膜電位變化的相關(guān)性。雖然SBFI對(duì)Na+的選擇能力弱于Ca2+指示劑比如Fura-2，但在其他單價(jià)陽離子存在體系，SBFI足以檢測(cè)Na+的生理濃度。結(jié)合離子后的SBFI光譜反應(yīng)可通 過激發(fā)光比率測(cè)定來判定，其能與用相同光濾片和儀器檢測(cè)的探針Fura-2共同使用。當(dāng)體系內(nèi)含生理濃度的K+/Na+（~135mM），SBFI對(duì)Na+的解離常數(shù)（Kd）為11.3mM；而不存在K+體系，對(duì)Na+的Kd為3.8mM。SBFI 對(duì)Na+的選擇性比K+約強(qiáng)18倍。
本品為乙酰氧基甲基酯（Acetoxymethyl ester, AM ester）形式的SBFI，CAS NO：129423-53-6，具有細(xì)胞膜滲透性，只需簡(jiǎn)單孵育即可進(jìn) 入細(xì)胞，常用加載濃度范圍5-10µM，加載時(shí)間40min-4h，根據(jù)具體的實(shí)驗(yàn)要求和細(xì)胞類型來調(diào)整。
二、產(chǎn)品特性
1）化學(xué)名：4,4’-[1,4,10-trioxa-7,13-diazacyclopentadecane-7,13-diylbis(5-methoxy-6,2-benzofurandiyl)]bis-1,3- benzenedicarbox ylic acid 1,1’,3,3’-tetrakis[(acetyloxy)methyl] ester
2）同義名：Sodium-binding Benzofuran Isophthalate Acetoxymethyl ester
3）CAS NO：129423-53-6
4）分子式：C56H58N2O23
5）分子量：1127.07
6）純度：＞90%（HPLC）
7）Ex/Em：340,380/500 nm
8）外觀：淺黃至暗黃至暗橙固體或油狀
9）溶解性：溶于DMSO（10mM）
10）化學(xué)結(jié)構(gòu)式：
三、保存與運(yùn)輸方法
保存：-20℃避光干燥穩(wěn)定凍存二年。 運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。
四、注意事項(xiàng)
1）SBFI AM易受潮，粉末需要干燥保存；需用無水DMSO溶解，配制儲(chǔ)存液（如10mM），置于-20℃干燥避光，小量分裝避免反復(fù)凍融，至 少3個(gè)月穩(wěn)定。
2）由于SBFI AM水溶性較差，可在實(shí)驗(yàn)前與等體積Pluronic F-127（25% w/v）混合，以提高探針加載效率。
3）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
五、SBFIAM（Na+ Indicator）使用和注意事項(xiàng)
以下步驟僅做參考，具體請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況或參考文獻(xiàn)資料來調(diào)整。
1）配置1-10mM SBFI AM儲(chǔ)存液∶比如，實(shí)驗(yàn)前取一管50ug SBFI AM置于室溫回溫至少20min，低速離心后，往管內(nèi)加入8.8723ul無水DMSO使其充分溶解后，制備成5mM儲(chǔ)存液。若單次用不完，需分裝凍存。
2)準(zhǔn)備25%（w/v）Pluronic F-127∶100mg Pluronic F-127粉末中加入 400μl DMSO，配制成25%（w/v）DMSO母液。溶解過程需要在40-50℃加熱20-30min。溶液室溫保存，不用冷藏。如有結(jié)晶析出，可以重新加熱后溶解，不影響使用?！疽部膳渲贸善渌麧舛萈luronic F-127，只需保證最終工作體系內(nèi) Pluronic F-127<0.1%（w/v）】。
3)于正式實(shí)驗(yàn)前，將 SBFI AM 儲(chǔ)存液于等體積25%（wv）Pluronic F-127混勻?！咀⒁狻肧BFIAM水溶性差，必須借助 Pluronic F-127來促進(jìn)其分散進(jìn)入水溶性加載緩沖液。兩者只能在實(shí)驗(yàn)前混勻，不能保存待用】。
4)將上述混合液加入適量細(xì)胞加載緩沖液（如生理緩沖液PBS，無血清細(xì)胞培養(yǎng)基等）達(dá)到所需的工作濃度，加入細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行探針標(biāo)記。孵育溫度可以是室溫或37℃，孵育濃度通常為5-10μM，時(shí)間40min-4h，具體的孵育濃度和時(shí)間請(qǐng)參考相關(guān)的文獻(xiàn)資料。
5)孵育結(jié)束，再加入不含探針的細(xì)胞加載緩沖液額外孵育 20-60min，以保證細(xì)胞將 SBFI AM*酯酶化。
6）最后用生理緩沖液或無血清培養(yǎng)基清洗細(xì)胞至少一次，以降低胞外背景熒光。
7)用合適的儀器檢測(cè)熒光信號(hào)，分別收集激發(fā)波長(zhǎng) 340nm，380nm，發(fā)射波長(zhǎng)500nm（發(fā)射波長(zhǎng)范圍450-550nm，根據(jù)你的實(shí)際熒光信號(hào)看看最大波長(zhǎng)吸收峰大概在哪個(gè)位置）。根據(jù)雙激發(fā)波長(zhǎng)收集熒光信號(hào)的比值來確定離子濃度。
【注意事項(xiàng)】∶
1）如果細(xì)胞加載緩沖液是以碳酸氫鈉為緩沖體系，那么加載需要含5%CO2的環(huán)境內(nèi)進(jìn)行，以防止因CO2損失引起的緩沖液堿化。
2）如果細(xì)胞加載緩沖液含血清，那需適當(dāng)提高 AM探針工作濃度，以補(bǔ)償因 AM探針與血清蛋白結(jié)合引起的損失。
3）某些情況下，對(duì)分子量接近或超過1000的 AM探針，需用不含 AM探針的細(xì)胞加載緩沖液進(jìn)一步孵育 20-60min，以保證細(xì)胞內(nèi)酯酶能充分降解 AM基團(tuán)。
4)探針的加載時(shí)間和濃度因具體的細(xì)胞類型而有差異，請(qǐng)使用前參考相應(yīng)的文獻(xiàn)資料來設(shè)計(jì)和摸索最佳條件。
5)探針的細(xì)胞 Kd值與溶液 Kd值有差異，SBFI的胞內(nèi)Kd值可用通道形成抗生素如gramicidin來校準(zhǔn)（calibration）。根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)要求來決定是否做這一步。
可查閱文獻(xiàn)∶a）Negulescu PA et al. Intracellular ion activities and membrane transport in parietal cells measured with fluorescent dyes. Methods Enzymol. 1990;192:38-81.
b)Harootunian et al,Ratio imaging using a newly developed Fluorescent sodium indicator in rat fibroblasts. FASEBJ2:A728(1988).
c)Harootunian et al. Fluorescent ratio imaging of cytosolic free Na+ in fibroblasts and lymphocytes Journal of Biological Chemistry 1989.