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FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亞鐵離子探針特性
閱讀：383 發(fā)布時(shí)間：2022-8-10FeRhoNox-1 (Fe2+indicator) 亞鐵離子熒光探針
一、產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
FeRhoNox-1，也稱為RhoNox-1，是一種活躍的熒光探針，特異性檢測(cè)不穩(wěn)定的鐵(II)離子（Fe2+）。一旦與Fe2+反應(yīng)后，不可逆的生成一種橙色（紅色）熒光產(chǎn)物（Absmax=540nm，F(xiàn)Lmax=575nm，圖1.FeRhoNox-1的光譜特征）。生理濃度下的鐵（III）離子（Fe3+）或其它除鐵離子以外的二價(jià)金屬離子都不會(huì)使其熒光增強(qiáng)（見(jiàn)圖2FeRhoNox-1的選擇性）.FeRhoNox-1的反應(yīng)特異性）。FeRhoNox-1具細(xì)胞膜滲透性和高選擇性，適用于活細(xì)胞內(nèi)Fe2+的檢測(cè)，傾向定位在高爾基體。
圖1. FeRhoNox-1的光譜特征。FeRhoNox-1與Fe2+反應(yīng)后吸收和發(fā)射光譜（上）。FeRhoNox-1在37℃，與Fe2+反應(yīng)1h后，熒光明顯增強(qiáng)。最大熒光峰約在575nm。
圖2. FeRhoNox-1的選擇性。FeRhoNox-1僅與Fe2+反應(yīng)。
保存及運(yùn)輸：-20℃避光干燥保存，至少1年有效。運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。
二、操作步驟
1.需要自行準(zhǔn)備的材料
1.1細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)或超純DMSO（CAT：#FS0306）【強(qiáng)烈建議將高純的DMSO分裝成單次用量保存在極低溫冷凍室內(nèi)，比如-80℃，避免吸潮。降解的DMSO可能會(huì)增加FeRhoNox-1的背景信號(hào)】
1.2合適的清洗和觀察緩沖液（比如：PBS, pH 7.4；HBSS；等）。[注意]不要含有酚紅。
2.探針準(zhǔn)備
2.1從冰箱取出FeRhoNox-1，置于室溫回溫至少30min，將其置于微量離心機(jī)內(nèi)低速離心。將瓶?jī)?nèi)的粉末離心到管底后，再開(kāi)蓋。
2.2往一管FeRhoNox-1（50μg）內(nèi)加入109μl高質(zhì)量DMSO，用槍反復(fù)吹吸5次或以上，使其*溶解即得到1mMFeRhoNox-1儲(chǔ)存液。建議單次用完儲(chǔ)存液，若實(shí)在用不完，請(qǐng)根據(jù)單次用量分裝，置于-80℃避光保存。用中性緩沖液來(lái)稀釋儲(chǔ)存液。
2.3于正式實(shí)驗(yàn)前，用HBSS或其他中性緩沖液來(lái)稀釋1mMFeRhoNox-1儲(chǔ)存液到所需工作濃度（比如：5μM），工作液需現(xiàn)配現(xiàn)用，盡快用完。
3.染色步驟
3.1從玻璃底培養(yǎng)皿上培養(yǎng)的細(xì)胞中吸掉培養(yǎng)液。
3.2吸掉上清液，用 HBSS 清洗細(xì)胞 2 次。
3.3加入含5μM FeRhoNox-1的染色工作液，于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育60min。
3.4在熒光顯微鏡下觀察細(xì)胞。
4.熒光檢測(cè)
對(duì)于熒光激發(fā)：通用的綠色激發(fā)濾片比如Cy3或四甲基羅丹明（TMR）檢測(cè)用的濾片。
對(duì)于激光激發(fā)：532nm或543nm激光器比較適合。發(fā)射波長(zhǎng)為570nm左右。
注意事項(xiàng)
1)FeRhoNox-1傾向定位在高爾基體，但也可能檢測(cè)細(xì)胞質(zhì)池內(nèi)的Fe2+，目前針對(duì)這一點(diǎn)未做明確評(píng)估。
2)酸性溶液會(huì)氧化FeRhoNox-1，嚴(yán)重影響探針的效率。
3)熒光染料均存在淬滅問(wèn)題，請(qǐng)盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。
4)為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
附錄F eRhoNox-1的染色示例
I. HepG2細(xì)胞 圖3. FeRhoNox-1在HepG2活細(xì)胞內(nèi)的成像檢測(cè)。①-Fe(II)：細(xì)胞未添加亞鐵離子（100μM硫酸亞鐵銨）；②+Fe(II)：細(xì)胞加載亞鐵離子；③+Fe(II)+Bpy：細(xì)胞加載亞鐵離子，之后用加入鐵離子螯合劑Bpy。圖②熒光增強(qiáng)，而圖③熒光降低。此結(jié)果與FeRhoNox-1特異性檢測(cè)Fe(II)的特征一致。