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活體動(dòng)物生物發(fā)光成像，是將螢光素酶基因整合到細(xì)胞染色體DNA上以表達(dá)螢光素酶，當(dāng)外源（腹腔或靜脈注射）給予其底物螢光素（luciferin），即可在幾分鐘內(nèi)產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。
而其中最常見(jiàn)也是應(yīng)用范圍廣泛的就是螢光素鉀鹽，關(guān)于螢光素鉀鹽這個(gè)產(chǎn)品，近期小編收到了一例客戶(hù)咨詢(xún)，接下來(lái)讓我們一探究竟吧！
Q:您好，有一個(gè)實(shí)驗(yàn)上的問(wèn)題想請(qǐng)教，在使用D-螢光素鉀鹽配置儲(chǔ)備液時(shí)，有時(shí)會(huì)出現(xiàn)渾濁的現(xiàn)象，該怎么解決呢？
A:老師，您好，請(qǐng)問(wèn)您配置液的濃度一般在多少呢？
Q:25mg/ml至50mg/ml都會(huì)有，在25mg/ml時(shí)也會(huì)出現(xiàn)不溶解的情況。
A:建議您添加少量碳酸鉀溶液溶解，不過(guò)可能會(huì)延長(zhǎng)信號(hào)接收時(shí)間。
小編溫馨提示
D-螢光素鉀鹽若純度可以達(dá)到99%以上，常溫水溶液中溶解度可以達(dá)到41mg/mL！市面上很多產(chǎn)品，溶解度只有20mg/mL。甚至還會(huì)出現(xiàn)渾濁情況，這從側(cè)面反映出其實(shí)有效純度是不夠的，很大程度上會(huì)影響實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。
關(guān)于逐典D-螢光素鉀鹽看這里
逐典D-熒光素鉀鹽，純度高（HPLC>=99%）,溶解度可達(dá)40mg/ml以上，擁有較好的水溶性和脂溶性，相較于D-螢光素（游離酸）能更好應(yīng)用于體外活細(xì)胞和體內(nèi)活體生物發(fā)光成像等研究。
客戶(hù)之聲
常見(jiàn)問(wèn)題答疑
Q:D-螢光素鉀鹽的純度是多少？純度大小對(duì)實(shí)驗(yàn)有影響嗎？
A:D-螢光素鉀鹽純度≥99 %，螢光素純度越高，相應(yīng)污染物含量越低，相反則越高，污染物濃度過(guò)高將抑制某些酶和細(xì)胞中的生物學(xué)過(guò)程，可能會(huì)給實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來(lái)偏差，并且可能會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成傷害。
Q:D-螢光素鉀鹽溶解度是多少？其溶液穩(wěn)定嗎？
A:D-螢光素鉀鹽溶解度在40 mg/ml以上，其水溶液短期內(nèi)存放于-80℃，對(duì)實(shí)驗(yàn)效果沒(méi)有明顯影響。對(duì)于部分條件較敏感的實(shí)驗(yàn)，為了控制實(shí)驗(yàn)中的可變因素，推薦反應(yīng)液新鮮配制。例如，熒光素酶過(guò)低、非最適的反應(yīng)條件等都需要高質(zhì)量的底物才能進(jìn)行反應(yīng)。
Q:D-螢光素鉀鹽的建議用量是多少？
A:活體成像：以10 μL/g體重確定注射量。每只小鼠接受150 mg D-螢光素鉀鹽/kg體重（如對(duì)于體重為10 g的小鼠，需要注射100 μL以提供1.5 mg D-螢光素鉀鹽）。
體外成像：一般使用150μg/ml的工作液用于體外細(xì)胞成像。
Tips: 注射方式、動(dòng)物類(lèi)型以及體重等都會(huì)影響信號(hào)的發(fā)射，需要適當(dāng)摸索，待螢光信號(hào)達(dá)到強(qiáng)穩(wěn)定平臺(tái)期，再用相應(yīng)儀器進(jìn)行成像分析。
Q:配置好的D-螢光素鉀鹽溶液如何儲(chǔ)存？
A:工作液現(xiàn)配現(xiàn)用，理想情況下，配置好的儲(chǔ)存液可于-20℃儲(chǔ)存較短時(shí)間。如有必要，螢光素溶液可在-20℃儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)3周。
Tips: 上述溶液在任何一種溫度長(zhǎng)時(shí)間貯存下都有可能導(dǎo)致信號(hào)退化哦！
Q:螢光素（酶）底物的形式有哪些？
A:分為D-螢光素游離酸、D-螢光素鉀鹽和D-螢光素鈉鹽，由于水溶性高，因此鉀鹽和鈉鹽通常是通用的兩種檢測(cè)底物，其中又以鉀鹽作為活體動(dòng)物檢測(cè)使用的主要形式。
Q:如何確定不同模型的峰值信號(hào)時(shí)間?
A:生物發(fā)光信號(hào)的動(dòng)力學(xué)具有組織依賴(lài)性。建議每5-10min對(duì)動(dòng)物進(jìn)行一次成像，最多40 min，為每個(gè)新模型創(chuàng)建一個(gè)動(dòng)力學(xué)曲線。(常見(jiàn)信號(hào)峰值時(shí)間點(diǎn)在10-15 min左右，螢光反應(yīng)發(fā)光一般在30 min后衰減，3 h后消失。)具體詳見(jiàn)逐典D-螢光素鉀鹽說(shuō)明書(shū)“螢光素動(dòng)力學(xué)曲線制備"。
Q:螢光素底物可以透過(guò)血腦屏障嗎？
A:螢光素底物約280 Da，螢光素的水溶性和脂溶性都非常好，很容易穿透細(xì)胞膜和血腦屏障。
Q:螢光素酶的表達(dá)穩(wěn)定性如何？
A:螢光素酶基因能夠通過(guò)穩(wěn)定篩選等過(guò)程插到細(xì)胞染色體內(nèi)，當(dāng)細(xì)胞進(jìn)行分裂、轉(zhuǎn)移、分化從而進(jìn)行持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)，螢光素酶的半衰期約為3 h，故只有活細(xì)胞才能持續(xù)表達(dá)螢光素酶。
