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SAECs（小氣道上皮細胞，Catalog: CC-2547）是藥物發(fā)現(xiàn)中靶點鑒定和驗證的重要模型。在本應用中簡要總結(jié)了利用 RNPs、384 孔 Nucleofector™ 系統(tǒng)（Catalog: AAU-1001）和 P3 原代細胞 384 孔 Nucleofector™ 試劑盒（Catalog: V5SP-3002）對 SAECs 進行自動陣列 CRISPR 篩選的工作流程。
隨著系統(tǒng)生物學與交叉學科方法的應用，要求細胞和系統(tǒng)模型越來越接近體內(nèi)細胞的功能。這就意味著將來的細胞轉(zhuǎn)染多數(shù)會是原代細胞的轉(zhuǎn)染。而傳統(tǒng)的方法很難成功轉(zhuǎn)染原代細胞。另外即使使用細胞系做為系統(tǒng)模型，傳統(tǒng)的方法也難重復出好的細胞轉(zhuǎn)染效率與成活率。Nucleofector技術就從根本上解決這個問題,無論是原代細胞、干細胞、還是細胞系,它每次都可重復出很高的轉(zhuǎn)染效率。1998年，Nucleofectorm技術開發(fā)成功，2001年上市，是龍沙在市場上第一個有效的、非病毒介導的、用于原代細胞與難轉(zhuǎn)細胞系的轉(zhuǎn)染方法?，F(xiàn)在Lonza還在繼續(xù)不斷改革創(chuàng)新,為研究者推出更多更好的新產(chǎn)品。
原理
Nucleofector™/技術是一種基于通過施加電脈沖在細胞膜中瞬間產(chǎn)生小孔,綜合各種Nucleofector™程序和細胞類型特異性電轉(zhuǎn)試劑,使核酸底物不僅可以輸送到細胞質(zhì),還可以通過核膜進入細胞核。這使得細胞最高轉(zhuǎn)染效率可達99%,并使轉(zhuǎn)染成功不依賴于細胞的增殖分裂。
