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Q1:在使用溫度低于最適溫度37℃時(shí),如何保證全能核酸酶的應(yīng)用效果?
由于逐典全能核酸酶在0-45°C溫度范圍下都具有活力,全能核酸酶對(duì)核酸的消化效果取決于酶的添加量、消化溫度和反應(yīng)時(shí)間,當(dāng)反應(yīng)溫度較低時(shí),可以適當(dāng)延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間;不能依賴增加全能核酸酶添加量保證消化效果,避免添加量過大導(dǎo)致全能核酸酶殘留的問題。
Q2：消化體系中的什么物質(zhì)會(huì)影響全能核酸酶的酶活和消化效果?
消化體系中若含有高濃度的鈉鹽、鉀鹽,超過200mM時(shí)會(huì)受到明顯抑制,其余高于100mM磷酸鹽,100mM硫酸銨等均會(huì)抑制酶活。特別是消化體系中如含有EDTA金屬離子絡(luò)合劑,級(jí)全能核酸酶所必需的Mg2+蝥合掉,會(huì)使全能核酸酶損失超過90%的酶活力,此時(shí)可通過增加Mg2+濃度使全能核酸酶活力得到恢復(fù)。
Q3:在病毒疫苗生產(chǎn)過程中使用了全能核酸酶,后續(xù)如何去除以保證疫苗符合核酸酶殘留標(biāo)準(zhǔn)?
可根據(jù)病毒疫苗的分子量選取超過全能核酸酶分子量2倍的切向流膜包,當(dāng)然若目標(biāo)產(chǎn)物分子量較大,選取的切向流膜包(推薦300kDa切向超濾膜包孔徑越大去除效果越好,病毒疫苗均為大分子,所以目標(biāo)產(chǎn)物可以有效被截留,而全能核酸酶可以被除去;以濃縮病毒疫苗為例,超濾置換完成5個(gè)體積,全能核酸酶的清除率即可達(dá)到99.5%。
Q4:生物制品中全能核酸酶的殘留量是衡量生物制品質(zhì)量的重要指標(biāo)之一,如何判斷使用過程中最終產(chǎn)品的全能核酸酶殘留量?
全能核酸酶屬于重組蛋白表達(dá)產(chǎn)品,在生物制品中同樣不能有殘留,所以在生物制品生產(chǎn)過程中使用全能核酸酶去除核酸后,還需要對(duì)全能核酸酶進(jìn)行清除,并且進(jìn)行檢測(cè),確保產(chǎn)品符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。逐典可提供基于ELISA研發(fā)的全能核酸酶殘留檢測(cè)試劑盒,檢測(cè)限可達(dá)到0.2ng/mL。
