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傳統(tǒng)的轉(zhuǎn)染技術無法有效轉(zhuǎn)染許多常用于細胞療法的細胞類型,如原代T細胞。而電穿孔是一種強大的轉(zhuǎn)染工具,它利用電脈沖瞬時增加細胞膜的通透性,使裸物質(zhì)(如DNA/RNA、蛋白質(zhì)等)短時大量進入細胞完成載體遞送,以更低成本、更靈活高效和更安全可持續(xù)的優(yōu)勢,成為非病毒載體轉(zhuǎn)染中前景的新興技術之一。
然而你真的了解電穿孔技術嗎

RegMedNet所推出的電穿孔工具書中邀請到了Arsenal Biosciences的聯(lián)合創(chuàng)始人Theodore Roth和Lonza細胞工程研發(fā)主管Ludger Altrogge,重點回答了六道精華問題。

Theodore Roth
Arsenal Biosciences
聯(lián)合創(chuàng)始人

Ludger Altrogge
Lonza細胞工程研發(fā)主管
Interview
超越障礙:
關于非病毒轉(zhuǎn)染的訪談
Q1
Ludger, 電穿孔等非病毒方法在基因修飾方面的優(yōu)勢在哪里?
非病毒方法在使用的貨物/底物類型方面具有靈活性。例如,它不能只傳遞核酸(DNA、mRNA),也不能傳遞蛋白質(zhì),如用于CRISPR基因編輯的Cas9 RNPs。非病毒方法既適用于治療基因的瞬時表達,也適用于細胞的穩(wěn)定遺傳工程。前者可以通過通過傳遞mRNA或DNA(質(zhì)粒、而轉(zhuǎn)座酶系統(tǒng)(如睡美人或 PiggyBac)以及用于定向整合的工程化核酸酶(如CRISPR)可實現(xiàn)穩(wěn)定的細胞基因工程。基于病毒和轉(zhuǎn)座酶的改造通常更有效,但由于整合在基因組中隨機發(fā)生,因此可控性較差。將工程化的核酸酶作為重組的RNPs運送,可以更好地控制修飾的劑量。
Q2
Theo,你是如何在實驗室中使用電穿孔技術的?
Q3
Ludger,你能詳細介紹一下龍沙提供的非病毒基因轉(zhuǎn)移技術嗎?
Q4
Theo,在你看來,使用Nucleofector™技術進行CRISPR/Cas9介導的基因組編輯有哪些優(yōu)勢?
Q5
Theo,你們也進行 CRISPR 篩選嗎?
Q6
Theo,您認為核轉(zhuǎn)染技術在治療方法和藥物開發(fā)中的應用前景如何?
除此之外,更有以下內(nèi)容免費分享給大家。
Review:對間充質(zhì)干細胞進行改造以增強骨靶向性和骨再生能力

Poster:誘導性Cas9 T細胞:異體CAR-T細胞生成的創(chuàng)新平臺

Research article:用于體內(nèi)應用的人CD34+祖細胞的高效瞬時基因標記
Poster:原代人類肝細胞的高效轉(zhuǎn)染和長期持續(xù)功能性

Review:CRISPR介導的DNA甲基化模式修飾在癌癥治療新時代的應用
Benchmark:通過流式細胞術和桑格測序評估CRISPR/Cas9介導的CD19基因敲除GM24385細胞的方案