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賽爾瑞成（北京）生命科學(xué)技術(shù)有限公司
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在單克隆抗體的制備過(guò)程中，及時(shí)凍存原始孔的雜交瘤細(xì)胞以及克隆化得到的亞克隆細(xì)胞是十分重要的。因?yàn)樵跊](méi)有建立一個(gè)穩(wěn)定分泌抗體的細(xì)胞系的時(shí)候，細(xì)胞的培養(yǎng)過(guò)程中隨時(shí)可能發(fā)生細(xì)胞的污染、細(xì)胞突變、分泌抗體能力的喪失等等。如果沒(méi)有原始細(xì)胞的凍存，則可能因上述意外而前功盡棄。 因此，雜交瘤細(xì)胞的凍存在單克隆抗體制備過(guò)程中起著關(guān)鍵性作用。
目前，雜交瘤細(xì)胞的凍存方法同其他細(xì)胞系的凍存方法是一樣的。
傳統(tǒng)雜交瘤細(xì)胞的凍存：
傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液的組分：培養(yǎng)基、血清和DMSO按照一定的比例混合，或90%的血清+10% DMSO
傳統(tǒng)雜交瘤細(xì)胞凍存方法：
1. 初篩、復(fù)篩驗(yàn)證陽(yáng)性的每個(gè)單克隆細(xì)胞轉(zhuǎn)種3個(gè)48孔板的培養(yǎng)孔，培養(yǎng)至匯合度達(dá)90%；
2. 吸去培養(yǎng)基，加入傳統(tǒng)細(xì)胞凍存液（需現(xiàn)用現(xiàn)配）重懸細(xì)胞，調(diào)整濃度至1x106/ml，然后將這3個(gè)48孔板的培養(yǎng)孔細(xì)胞凍存懸液合并至一支細(xì)胞凍存管中；
3. 程序降溫方法凍存，先將凍存管置于4℃冰箱10分鐘，然后移至-20℃冰箱30分鐘，再移至-80℃冰箱保存16-18個(gè)小時(shí)（或隔夜），后才移至液氮罐中進(jìn)行長(zhǎng)期的儲(chǔ)存。
（其中需要注意的是-20℃條件下不可超過(guò)1個(gè)小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量的死亡。）
傳統(tǒng)雜交瘤細(xì)胞凍存面臨的困難：
1. 需現(xiàn)配凍存液，步驟繁瑣；
2. 因不能孔板原位凍存，且不能微量?jī)龃妫孕鑼?孔細(xì)胞合并一管凍存管凍存，步驟繁瑣；
3. 需要程序降溫（4℃→-20℃→-80℃→液氮），步驟繁瑣；
4. 含血清，細(xì)胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風(fēng)險(xiǎn)更高；
5. 血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異；
6. 只能液氮凍存，不能-80℃冰箱凍存。
Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液，是一款可用于雜交瘤細(xì)胞凍存的凍存液，成分明確，含DMSO、糖類(lèi)、氨基酸等成分，不含血清和動(dòng)物源成分的通用型凍存液。
可取4mL無(wú)血清細(xì)胞凍存液試用裝
申領(lǐng)活動(dòng)日期：2019.11.18-2019.12.31
Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的方法：
1. 驗(yàn)證陽(yáng)性克隆的細(xì)胞培養(yǎng)孔，將培養(yǎng)基上清小心吸取干凈；
2. 加入適量Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液，充分浸潤(rùn)細(xì)胞（無(wú)需消化細(xì)胞）；
3. 蓋上蓋板，直接放入-80℃冰箱，長(zhǎng)期冷凍保存。
可見(jiàn)，Cellregen無(wú)血清細(xì)胞凍存液凍存雜交瘤細(xì)胞的優(yōu)勢(shì)：簡(jiǎn)單、方便、快捷
1. 即用型，無(wú)需現(xiàn)配，可直接使用
2. 可孔板原位凍存，可微量?jī)龃?，無(wú)需使用凍存管
3. 無(wú)需程序降溫，可直接放置-80℃凍存，操作簡(jiǎn)單
4. 不含血清，大大減少細(xì)胞污染
5. 因不含血清，批次間差異小
6. 無(wú)需液氮，-80℃冰箱長(zhǎng)期凍存
