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細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)

1. 細(xì)胞收到后建議在培養(yǎng)箱穩(wěn)定4小時(shí)左右再依據(jù)細(xì)胞密度，換液培養(yǎng)或傳代。

2. 如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞及時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶中繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基，培養(yǎng)2-3天。若3天后細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增殖而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室，技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決。

3. 貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢：適當(dāng)提高血清濃度（高不超過(guò)20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)。

4. 生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)生長(zhǎng)不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重新打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

 

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作）

1. 吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2~3 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化時(shí)間，通常控制在1~2min）。

2. 鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁運(yùn)動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让福?~8ml *培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落、吹散。

3. 取出部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

4. 注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液，待細(xì)胞密度達(dá)到70-80%時(shí)重復(fù)傳代操作或者凍存。