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實驗中免疫組化結(jié)果評判的三種方法
閱讀：6369 發(fā)布時間：2021-8-11 免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)又稱免疫細胞化學(xué)，是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理，組織切片或細胞標本中的抗原和一抗結(jié)合，再利用一抗與標記生物素的二抗進行反應(yīng)，前者再用標記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素（如鏈霉親和素）結(jié)合，最后通過呈色反應(yīng)在光學(xué)顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)物，從而原位確定特定蛋白質(zhì)的分布和含量。免疫組化，是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng)，即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理，通過化學(xué)反應(yīng)使標記抗體的顯色劑（熒光素、酶、金屬離子、同位素）顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原（多肽和蛋白質(zhì)），對其進行定位、定性及相對定量的研究。想要在做完實驗評判結(jié)果，現(xiàn)教您三種方法，簡單易學(xué)，方便快捷，一起來看看吧！
（1）陽性著色細胞計數(shù)法
在40光鏡下，隨機選擇不重疊的10個視野，人工或機器計數(shù)陽性著色細胞，每組3~6張不同動物組織切片，然后進行組間比較即可。
（2）灰密度分析法
通過在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進行灰密度分析，然后進行統(tǒng)計分析即可。
（3）評分法
通過在光學(xué)顯微鏡下對組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽性范圍進行評分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），終了時可以分數(shù)相加，再進行比較。
對于以上這幾種方法，各有利弊，請細心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是您要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。