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ELISA標本的處理與注意事項
閱讀：913 發(fā)布時間：2022-10-10 ELISA是酶聯(lián)接免疫吸附劑測定( Enzyme-Linked Immunosorbnent Assay )的簡稱。它是繼免疫熒光和放射免疫技術(shù)之后發(fā)展起來的一種免疫酶技術(shù)。
ELISA的檢測目的是為了實驗提供準確的實驗依據(jù)，為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性，在實驗過程中必須堅持全面的質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制，在收集標本前都必須有一個完整的計劃。
ELISA標本的處理：
1、血清：室溫血液私人凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清，保存過程中如出現(xiàn)沉淀，應再次離心。
2.血漿：應根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，如有沉淀形成，應再次離心
3.尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
4.細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成分時，用無菌管收集，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）仔細收集上清，檢測細胞內(nèi)的成分時，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右，通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成分。
5.組織標本：切割標本后，稱取重量，加入一定量的PBS，PH7.4，用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?，標本融化后任然保?-8°C的溫度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標本勻漿充分，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分），仔細收集上清，分裝后一份待檢測，其余冷凍備用，
6.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應盡快進行試驗，若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20°C保存，單應避免反復凍融。
在檢測時，受檢標本（測定其中的抗原）與固相載體表面的抗體反應。洗滌后加入酶標記的抗體，通過反應結(jié)合在固相載體上。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。
注意事項：
1、每個樣本量收集體積=100ulx檢測種類，如果要做復孔，標本量收集體積=100ulx檢測種類x2
2、樣本收集后若在一周內(nèi)進行檢測可保存于2-8°C，若不及時檢測，請進行分裝，凍存于-20°或-80°C，避免反復凍融
3、試劑盒的檢測范圍不等同于樣本中待測物的濃度范圍，建議實驗前通過相關(guān)文獻預估樣本中待測物的濃度并通過預實驗確定樣本。
4、血清標本采集是應注意避免溶血，紅細胞溶解是會釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，溶血標本可能會增加非特異性顯色
5、為了保證尿液檢測的準確性，必須正確收集尿液標本和保存，收集尿液的容器必須要清潔干燥，最好使用一次性的容器，避免因用藥并清潔不到而造成的污染，尿液樣本必須新鮮，留取后，應及時檢測或保存
6、標本宜在新鮮是檢測如有細菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會產(chǎn)生假陽性反應。如在冰箱中保存過久，其中可能發(fā)生聚合，間接法ELISA中樂視本底加深，
7、反復凍融會使蛋白效價降低，所以待測樣本如需多次檢測，宜少量分裝凍存。