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            熒光PCR儀常見故障的解決辦法很簡(jiǎn)單

            閱讀:7209      發(fā)布時(shí)間:2022-8-9
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              實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種在DNA擴(kuò)增反應(yīng)中,以熒光化學(xué)物質(zhì)測(cè)每次聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)循環(huán)后產(chǎn)物總量的方法。通過內(nèi)參或者外參法對(duì)待測(cè)樣品中的特定DNA序列進(jìn)行定量分析的方法。
              熒光PCR方法檢測(cè)病原體已成為常規(guī)檢測(cè)技術(shù),在工作過程中我們也遇到了各種各樣、千奇百怪的問題,那么在PCR儀出現(xiàn)故障的時(shí)候應(yīng)該怎么解決呢?
              01反應(yīng)后反應(yīng)管壁出現(xiàn)液滴?
              原因1:運(yùn)行程序前沒有開啟熱蓋加熱功能
              解決方法:開啟熱蓋加熱功能
              原因2:反應(yīng)結(jié)束后低溫保存時(shí)間過久
              解決方法:運(yùn)行結(jié)束后,熱蓋將自動(dòng)關(guān)閉,所以冷凝會(huì)自然出現(xiàn),這不會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響,將反應(yīng)管置于離心機(jī)上瞬時(shí)離心機(jī)使液滴回到管子底部即可。
              02反應(yīng)管氣泡在 PCR 反應(yīng)時(shí),加熱破裂
              反應(yīng)時(shí)在實(shí)驗(yàn)過程中出現(xiàn)了氣泡,導(dǎo)致中途產(chǎn)生了較大的波動(dòng),其特點(diǎn)是單個(gè)樣本的幾個(gè)通道的熒光曲線同時(shí)在某個(gè)循環(huán)出現(xiàn)趨勢(shì)一致的波動(dòng)。
              分析原因:氣泡在 PCR 反應(yīng)的過程中被加熱,在某個(gè)時(shí)刻破裂,此時(shí)出現(xiàn)熒光擾動(dòng),在這個(gè)循環(huán)檢測(cè)到的熒光型號(hào)和上一個(gè)循環(huán)不一樣,此時(shí)如果波動(dòng)位于基線期很可能就被軟件識(shí)別為開始擴(kuò)增的拐點(diǎn),擴(kuò)增曲線就會(huì)產(chǎn)生結(jié)果。
              03使用微孔板,
              反應(yīng)后反應(yīng)液有明顯蒸發(fā)?
              方法1:確保使用高質(zhì)量的微孔板,反應(yīng)前要嚴(yán)格密封;
              方法2:確保蓋熱蓋,適當(dāng)提高熱蓋的溫度;
              方法3:增大反應(yīng)體積。
              04使用PCR管,
              反應(yīng)后PCR的管內(nèi)反應(yīng)液有明顯蒸發(fā)?
              方法1:確保使用高質(zhì)量的PCR管;
              方法2:在樣品臺(tái)的四角放置四個(gè)同樣的空PCR管,以保證熱蓋壓在哥PCR管上的壓力均勻。
              05PCR實(shí)驗(yàn)結(jié)束后,
              樣品可以一直放在PCR儀中低溫保存嘛?
              當(dāng)程序運(yùn)行結(jié)束后,及時(shí)取出樣品并停止儀器運(yùn)行,而不要把儀器當(dāng)“冰箱”使用,低溫保存時(shí)溫度盡量設(shè)定得比較高,如8℃,這可以延長(zhǎng)儀器的使用壽命。

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