產(chǎn)品規(guī)格

JM110：                                                     100μl/支

pUC19 (control vector，10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質(zhì)期)：                            -80℃（6個(gè)月） 

基因型

rpsL (Str^R) thr leu thi-1 lacY galK galT ara tonA tsx dam dcm supE44 Δ(lac-proAB) /F′ [traD36 proAB lacI^qlacZΔM15] 

產(chǎn)品說(shuō)明

JM110菌株具有硫酸鏈霉素抗性(Str^R)；是甲基化基因dam、dcm缺失的菌株，提取得到的質(zhì)粒DNA，可被對(duì)dam、dcm甲基化敏感的內(nèi)切酶切割；lacI^qlacZΔM15的存在使JM110可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選，但轉(zhuǎn)化效率不高，一般不用于質(zhì)粒構(gòu)建，只適用于質(zhì)粒轉(zhuǎn)化。JM110感受態(tài)細(xì)胞經(jīng)特殊工藝制作，pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率約10⁷ cfu/μg DNA。

操作方法

1. JM110感受態(tài)細(xì)胞從-80℃拿出，迅速插入冰中，5分鐘后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打)，冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰中并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基 (2YT或LB)，混勻后37℃，200 rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌，留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

5.將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)

1. 感受態(tài)細(xì)胞在冰中緩慢融化，插入冰中8分鐘內(nèi)加入目標(biāo)DNA，不可在冰中放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，長(zhǎng)時(shí)間存放會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

2. 混入質(zhì)粒時(shí)應(yīng)輕柔操作。

3. 轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)?？上鄳?yīng)減少終用于涂板的菌量。