OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞

OrigamiB(DE3) Chemically Competent Cell

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產品規(guī)格:

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞基因型：

F^-ompT hsdS_B(r_B^-m_B^-) gal dcm lacY1 ahpC (DE3) gor522::Tn10 trxB (Kan^R,Tet^R)

 

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞簡要說明：

 OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞包含突變的硫氧還蛋白還原酶（thioredoxin reductase）(trxB) 和谷胱甘肽還原酶(glutathione reductase)(gor)基因，表達主要還原途徑的兩個關鍵酶。有利于形成正確折疊的含有二硫鍵的蛋白，增強蛋白的可溶性。 
該菌株染色體整合了λ噬菌體DE3區(qū)（DE3區(qū)含有T7噬菌體RNA聚合酶），可同時表達T7 RNA聚合酶和大腸桿菌RNA聚合酶，可用于pET系列，pGEX，pMAL等質粒的蛋白表達，具有卡那霉素和四環(huán)素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性質粒的表達。
OrigamiB (DE3) 感受態(tài)細胞由特殊工藝制作，經pUC19質粒檢測轉化效率達10⁸cfu/μg。
 
 

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞操作說明：

1.  取100μl冰上融化的OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞，加入目的質粒并輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動會降低轉化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。

1.  將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)。

OrigamiB(DE3)感受態(tài)細胞注意事項：

1.   感受態(tài)細胞在冰上融化。
2.  混入質粒時應輕柔操作。
3.  轉化高濃度的質?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。
4.  誘導時，IPTG濃度可選（0.1-2mM均可）。
5.  為獲得需要量的蛋白，誘導時間，溫度，IPTG濃度需實驗者優(yōu)化。

6. 具有卡那霉素抗性，不能用于具有卡那霉素抗性質粒的表達。