關(guān)于建設(shè)PCR實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備配置與要求

第（一）章 總 則
    第（一）條 為規(guī)范臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理，保證臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)質(zhì)量，使臨床診斷和治療更為科學(xué)、合理，特制定本辦法。
    第二條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)技術(shù)指以臨床診斷治療為目的，以擴(kuò)增檢測(cè)DNA或RNA為方法的檢測(cè)技術(shù)，如聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、轉(zhuǎn)錄依賴的放大系統(tǒng)（TAS）自主序列復(fù)制系統(tǒng)（3SR）和鏈替代擴(kuò)增（SDA）等。
    第三條 本辦法適用于開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室。臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室設(shè)立在二級(jí)以上醫(yī)院。
    第四條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須使用經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的臨床檢驗(yàn)試劑開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。
    第五條 衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱衛(wèi)生部臨檢中心）和省、自治區(qū)、直轄市臨床檢驗(yàn)中心（以下簡(jiǎn)稱省臨檢中心）負(fù)責(zé)對(duì)所轄行政區(qū)域內(nèi)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量監(jiān)督管理工作。
 
第二章 實(shí)驗(yàn)室設(shè)置和驗(yàn)收 
    第六條 擬設(shè)置臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的醫(yī)療機(jī)構(gòu)按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》（見(jiàn)附件）籌建實(shí)驗(yàn)室；籌建完成后，由法定代表人向衛(wèi)生部臨檢中心提出技術(shù)驗(yàn)收申請(qǐng)。申請(qǐng)時(shí)需提交以下材料：
（一）《醫(yī)療機(jī)構(gòu)執(zhí)業(yè)許可證》復(fù)印件；
（二）可行性研究報(bào)告；
1、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室機(jī)構(gòu)的所在地醫(yī)療衛(wèi)生資源狀況、本機(jī)構(gòu)的基本情況、對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的需求以及臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行的預(yù)測(cè)分析；
2、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置平面圖；
3、 擬設(shè)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室將開(kāi)展的檢驗(yàn)項(xiàng)目、實(shí)驗(yàn)設(shè)備條件和有關(guān)技術(shù)人員資料
    第七條 衛(wèi)生部臨檢中心和省臨檢中心共同組織相關(guān)專業(yè)的專家組（以下簡(jiǎn)稱專家組），按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)》對(duì)提出申請(qǐng)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收。驗(yàn)收完成后，在20日內(nèi)將驗(yàn)收?qǐng)?bào)告寄送至申請(qǐng)機(jī)構(gòu)。
    第八條 經(jīng)專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的醫(yī)療機(jī)構(gòu)將本辦法第六條規(guī)定的材料及專家組驗(yàn)收?qǐng)?bào)告送至省級(jí)行政部備案。在將符合規(guī)定的全部材料送達(dá)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)后15日內(nèi)未收到省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)不同意的意見(jiàn)，方可開(kāi)展專家組技術(shù)驗(yàn)收合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。
    第九條 未經(jīng)專家組驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案的醫(yī)療機(jī)構(gòu)不得擅自開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。
第三章 實(shí)驗(yàn)室監(jiān)督管理
    第十條 臨床基因檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照《臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》（另發(fā)）開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。
    第十一條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員必須進(jìn)行上崗培訓(xùn)。經(jīng)培訓(xùn)合格者，由培訓(xùn)單位發(fā)給合格證書(shū)，并將培訓(xùn)合格人員名單報(bào)衛(wèi)生部臨檢中心備案。獲得培訓(xùn)合格證書(shū)者方可從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)工作。
    培訓(xùn)單位為衛(wèi)生部臨檢中心，或由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)并經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心認(rèn)定的機(jī)構(gòu)。培訓(xùn)時(shí)使用規(guī)定的統(tǒng)一教材。
    第十二條 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。不得向臨床出具檢驗(yàn)報(bào)告，不得向病人收取任何費(fèi)用。
    第十三條 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室必須按照《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制，并參加衛(wèi)生部臨檢中心組織的室內(nèi)質(zhì)量評(píng)價(jià)。
    第十四條 衛(wèi)生部臨檢中心按照本方法和《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室工作規(guī)范》協(xié)調(diào)、組織省臨檢中心對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室的檢驗(yàn)質(zhì)量進(jìn)行監(jiān)測(cè)。監(jiān)測(cè)結(jié)果報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)，同時(shí)抄送被監(jiān)測(cè)的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)。
    第十五條 衛(wèi)生部臨檢中心或省級(jí)臨檢中心受省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)委托可對(duì)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查，現(xiàn)場(chǎng)檢查工作人員在履行職責(zé)時(shí)應(yīng)出示證件。在進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)檢查時(shí)，檢查人員有權(quán)調(diào)閱有關(guān)資料，被檢查機(jī)構(gòu)不得拒絕或隱瞞。
    第十六條 衛(wèi)生部臨檢中心對(duì)在室間質(zhì)量評(píng)價(jià)中不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室提出警告，對(duì)連續(xù)二次或三次中有二次發(fā)現(xiàn)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)結(jié)果不合格的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，衛(wèi)生部臨檢中心報(bào)省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)由省級(jí)以上衛(wèi)生行政部門(mén)責(zé)令其暫停有關(guān)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目，限期整改。經(jīng)專家組進(jìn)行再次技術(shù)驗(yàn)收并合格，并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)核準(zhǔn)后，方可重新開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目。
    第十七條 對(duì)于未經(jīng)衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生部門(mén)備案，擅自開(kāi)展臨床基因檢驗(yàn)項(xiàng)目的醫(yī)療機(jī)構(gòu)，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)依據(jù)《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例》第四十七條和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)管理?xiàng)l例實(shí)施細(xì)則》第八十條予以處罰，并予以公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付。
    第十八條 出現(xiàn)下列情況之一的臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室，由省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)責(zé)令其停止開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)，并對(duì)其所在醫(yī)療機(jī)構(gòu)予以公告。公告所需費(fèi)用由被公告機(jī)構(gòu)支付：
（一） 開(kāi)展超出衛(wèi)生部臨檢中心組織的技術(shù)驗(yàn)收合格并報(bào)省級(jí)衛(wèi)生行政部門(mén)備案 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的；
（二） 使用未經(jīng)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)的試劑開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；
（三） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未開(kāi)展室內(nèi)質(zhì)量控制的；
（四） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中未參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)的；
（五） 在臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)中弄虛作假的；
（六） 以科研為目的的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目向病人收取費(fèi)用的；
（七） 使用未經(jīng)培訓(xùn)合格的專業(yè)技術(shù)人員從事臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的；
第四章 附 則 
    第十九條 對(duì)采供血機(jī)構(gòu)的基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展基因擴(kuò)增檢驗(yàn)項(xiàng)目的管理，參照本辦法執(zhí)行。
    第二十條 衛(wèi)生部臨檢中心組織的專家組對(duì)申請(qǐng)開(kāi)展臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行技術(shù)驗(yàn)收所需費(fèi)用按國(guó)家有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。
    第二十一條 本辦法由衛(wèi)生部負(fù)責(zé)解釋。
    第二十二條 本辦法自發(fā)布之日起施行。
 
附：臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室基本設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)
根據(jù)《臨床檢驗(yàn)擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》，制定本標(biāo)準(zhǔn) 

關(guān)于建設(shè)PCR實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)備配置與要求

一、 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則
（一） 臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室區(qū)域設(shè)置原則
1、 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
2、 標(biāo)本制備區(qū)
3、 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
4、 擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
如使用全自動(dòng)分析儀，區(qū)域可適當(dāng)合并。
（二） 各工作區(qū)域必須有明確的標(biāo)記，避免不同工作區(qū)域內(nèi)的設(shè)備、物品混用。
（三） 進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行，即試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū) —>標(biāo)本制備區(qū)—>擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)—>擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
（四） 不同的工作區(qū)域使用不同的工作服（例如不同的顏色）。工作人員離開(kāi)各工作區(qū)域時(shí)，不得將工作服帶出。
 
二、 工作區(qū)域儀器設(shè)備配置標(biāo)準(zhǔn)
（一） 試劑儲(chǔ)存和準(zhǔn)備區(qū)
1、2-8C和-15C冰箱
2、混勻器
3、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
4、移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
5、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）
6、工作服和工作鞋
7、辦公用品
（二） 標(biāo)本制備區(qū)
1、2-8C冰箱、-20C或-80C冰箱
2、高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)
3、混允器
4、水浴箱或加熱模塊
5、微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
6、可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
7、超凈工作臺(tái)
8、消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）
9、工作服和工作鞋
10、辦公用品
如需處理大分子DNA，應(yīng)具有超聲波水浴儀。
（三） 擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)
1、 核酸擴(kuò)增儀
2、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
3、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
4、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、耐高壓處理的離心管和加樣器吸頭（帶濾心）
5、 工作服和工作鞋
6、 辦公用品
（四）擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)
視檢驗(yàn)方法不同而定。基本儀器設(shè)備如下：
1、 微量加樣器（覆蓋1-1000ul）
2、 可移動(dòng)紫外燈（近工作臺(tái)面）
3、 消耗品：一次性手套、一次性吸水紙、加樣器吸頭（帶濾心）
4、 工作服和工作鞋
5、 辦公用品
為了對(duì)以個(gè)特定序列進(jìn)行PCR做重復(fù)檢測(cè),需要三個(gè)不同的區(qū)域,每一個(gè)區(qū)域的具體技術(shù)操作和試劑在下面詳細(xì)列出：
1、樣品準(zhǔn)備區(qū)
這個(gè)區(qū)域?qū)ｉT(mén)用作樣品的準(zhǔn)備，在制備和操作用于核酸提取的試劑時(shí)應(yīng)該采
取預(yù)防措施：
1）PCR產(chǎn)物和帶有要擴(kuò)增序列的DNA克隆不能在這個(gè)房間操作。
2）組織培養(yǎng)物、組織標(biāo)本和血清樣品都帶進(jìn)樣品準(zhǔn)備間處理，以根據(jù)應(yīng)用的需要提取DNA或RNA。
3）用于樣品處理的工具不能被用作普通分子克隆的工具，也不能用作操作靶序列。
4）DNA樣品應(yīng)該用有專門(mén)的防護(hù)或正壓活塞式移液管操作，以防止在吸取樣品時(shí)有氣溶膠遺留。
5）大體積樣品應(yīng)該用單獨(dú)包裝的無(wú)菌一次性移液管吸取。
6）管子打開(kāi)前都要簡(jiǎn)短離心以減少氣溶膠的產(chǎn)生，而且管子不能用力崩開(kāi)，這樣會(huì)產(chǎn)生氣溶膠。
7）任何時(shí)候都應(yīng)該穿實(shí)驗(yàn)服和帶手套，手套要經(jīng)常更換，尤其在抽提過(guò)程中每一步之間都要更換。實(shí)驗(yàn)服要專門(mén)用于樣品準(zhǔn)備間，經(jīng)常清洗。
2、樣品準(zhǔn)備和RNA-PCR 
RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機(jī)會(huì)。為了避免這一問(wèn)題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準(zhǔn)備區(qū)進(jìn)行。在RNA-PCR中應(yīng)用UNG以防止污染的方法也有報(bào)道。
3、前PCR區(qū)
必須有專門(mén)用于準(zhǔn)備各種反應(yīng)的區(qū)域，這個(gè)區(qū)域必須保持干凈，而且沒(méi)有來(lái)自克隆和樣品準(zhǔn)備的污染。前PCR區(qū)必須要有試劑和準(zhǔn)備，特別是專門(mén)用于前PCR區(qū)的正壓活塞式移液管。
4、PCR實(shí)驗(yàn)室試劑的操作
1）所用的所有溶液都應(yīng)該沒(méi)有核酸和（或）核酸酶（DNase和RNase）污染。
2）所有PCR試劑中使用的水都應(yīng)該是高質(zhì)量的－新鮮蒸餾的去離子水，用0.22μm過(guò)濾的，并且是高壓滅菌。
3）在20℃到25℃貯存的試劑建議加點(diǎn)像疊氮鈉一類的抗微生物劑，在擴(kuò)增試劑或樣品制備試劑中加入0.025%的疊氮鈉不抑制擴(kuò)增反應(yīng)。
4）所用試劑都應(yīng)該以大體積配制，實(shí)驗(yàn)一下看試劑是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量進(jìn)行貯存。
5）所有試劑和樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的瓶子和管子。
6）新配制的試劑在用于準(zhǔn)備新的標(biāo)本之前應(yīng)該加以檢驗(yàn)。
7）樣品準(zhǔn)備和前PCR區(qū)所使用的移液管在不使用時(shí)都應(yīng)該小心保存。
5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物
1）可以把即刻可用的“主混合物”溶液配好、分裝并保存在-20℃或4℃，在實(shí)驗(yàn)室只涉及到擴(kuò)增一種或少數(shù)幾種特異序列時(shí)這樣做很有用。
2）如果你的實(shí)驗(yàn)室使用多套引物，以致于配制包括所有試劑的單一反應(yīng)混合物不夠經(jīng)濟(jì)，可以考慮分裝保存夠一天的PCR成分。
3）作為一個(gè)規(guī)則，應(yīng)該保存一套陰性、弱陽(yáng)性和強(qiáng)陽(yáng)性對(duì)照樣品來(lái)分析樣品配制和PCR前過(guò)程的效率和潔凈程度。而且，你也希望通過(guò)使用一個(gè)已知的弱陽(yáng)性樣品來(lái)驗(yàn)證你的樣品緩沖液以證明里面不含擴(kuò)增抑制物。
4）陰性樣品要與每組樣品同時(shí)做，以分析是否存在樣品與樣品之間的污染以及是否存在PCR產(chǎn)物的污染，陰性對(duì)照應(yīng)該包括核酸以外的所有試劑。
5）當(dāng)做陽(yáng)性對(duì)照時(shí)，有兩個(gè)理由決定了應(yīng)該使用少數(shù)量的核酸。
6）由于必須有對(duì)照反應(yīng)，對(duì)照模板的特點(diǎn)應(yīng)該予以考慮。
6、控制污染的方法
已設(shè)計(jì)出很有力的酶學(xué)方法用來(lái)消除一種形式的污染—使用UNG，這一技術(shù)能有效地消除由PCR產(chǎn)物引起的污染。另一種控制污染的方法是使用紫外線，這種方法不能*消除污染問(wèn)題，但可以將污染降低幾個(gè)數(shù)量級(jí)。
7、PCR儀的位置
8、后PCR區(qū)
PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應(yīng)該留出一個(gè)專門(mén)用于反應(yīng)后處理樣品的地方。后PCR活動(dòng)中使用的所用試劑、一次性耗材和儀器都必須是專門(mén)用于這一目的，決不能把實(shí)驗(yàn)室這一區(qū)域的試劑或儀器用于任何前PCR活動(dòng)。

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