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            行業(yè)產(chǎn)品

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            豬流感H3N2亞型檢測試劑盒(PCR法)

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            • 廠商性質(zhì) 生產(chǎn)商
            • 所在地 北京市
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            更新時間:2023/06/29 12:48:58瀏覽次數(shù):1159

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            產(chǎn)品簡介

            純度 99% 供貨周期 現(xiàn)貨
            規(guī)格 50T 應(yīng)用領(lǐng)域 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),綜合
            主要用途 病毒檢測
            ?豬流感H3N2亞型檢測試劑盒(PCR法)針對豬流感病毒H3N2的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含豬流感病毒H3N2基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

            詳細介紹

            豬流感H3N2亞型檢測試劑盒(PCR法)

            【產(chǎn)品名稱】

            通用名稱:豬流感H3N2亞型檢測試劑盒(PCR法)

            英文名稱Swine Influenza Virus H3N2 Detection Kit (Real-Time PCR Method)

            【包裝規(guī)格】 25/& 50/

            【預(yù)期用途】

            豬流感H3N2亞型檢測試劑盒(PCR法)利用實時熒光PCR原理,定性檢測豬流感病毒,對豬流感病毒引起的流感及其并發(fā)癥的診斷及療效評估有重要指導(dǎo)意義。

            【檢驗原理】

            豬流感H3N2亞型檢測試劑盒(PCR法)針對豬流感病毒H3N2的高度保守區(qū)域設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含豬流感病毒H3N2基因組模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用熒光定量PCR儀對PCR過程中相應(yīng)通道信號進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

            【儲存條件及有效期】避光-20℃以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個月。

            【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀。

            【樣本要求】

            1.取咽喉拭子和鼻.拭子,采集方法如下:

            (1) 咽喉拭子,采取時要將拭子深入喉頭及上顎裂來回刮3次~5次,取咽喉分泌液;

            (2) 鼻拭.子,將拭子深入鼻腔及周圍圈沾取分泌液;

            (3) 將咽喉拭子和鼻拭.子一起放入有 1.0 mL 生理鹽水的離心管中備用;

            (4) 理想情況下標(biāo)本應(yīng)使用頭部為合成纖維的拭子,用鋁或塑料做桿。不推薦棉拭子和木桿。

            2.血液或血清樣品:使用無菌注射液抽取樣品置于離心管中待檢。

            3.標(biāo)本采集管應(yīng)包含含有蛋白穩(wěn)定劑的病毒運輸液。

            4.應(yīng)避免標(biāo)本間交叉污染。

            5.標(biāo)本收集后可立即檢測;若不能立即檢測,可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標(biāo)本應(yīng)凍存于-80℃以下,避免反復(fù)凍融。

            【檢驗方法】

            1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

            1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

            2)核算當(dāng)次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當(dāng)次實驗所需要的各種試劑量。

            n =陰性對照數(shù)(1T+陽性對照數(shù)(1T+誤差預(yù)留量(1T+樣本數(shù)

            單反液配制表()

            RT-PCR反應(yīng)液

            15.0 μL

            逆轉(zhuǎn)錄酶

            2.0 μL

            Taq

            3.0 μL

            (3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

            2.樣本準備(樣本處理區(qū))

            QIAGENRoche公司RNA提取試劑盒提取RNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。

            3.加樣

            在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標(biāo)本RNA5 μl、終體積25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5 μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25 μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

            4. PCRPCR擴增區(qū))

            1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

            2)按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。


            反應(yīng)體積

            25 μL

            通道選擇

            FAM通道采集SIV-H3病毒熒光信號

            HEX通道采集SIV-N2病毒熒光信號

            PCR

            反應(yīng)

            條件

            步驟

            條件

            循環(huán)數(shù)

            反轉(zhuǎn)錄

               42℃10分鐘(min

            1

            預(yù)變性

            95℃3分鐘(min

            1

            預(yù)擴增

            95℃5秒(s

            5

            55℃40秒(s

            PCR擴增

            95℃5秒(s

            40

            55℃40秒(s

            (此階段結(jié)束時采集熒光信號)

            注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團選擇None

            【參考值(參考范圍)】

            1.試劑盒有效性判定:

            1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct≤35。

            2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

            2.標(biāo)本結(jié)果判定:

            1陽性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct≤35或有明顯指數(shù)增長期。

            2)可疑:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值在3538范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標(biāo)本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在3538范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

              3)陰性:標(biāo)本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

            【檢驗結(jié)果的解釋】

            通道及檢測結(jié)果

            標(biāo)本檢測結(jié)果解釋

            FAM

            HEX

            陽性(+)

            陽性(+)

            標(biāo)本檢出豬流感病毒H3亞型、豬流感病毒N2亞型RNA

            陽性(+)

            陰性(-)

            標(biāo)本檢出豬流感病毒H3亞型RNA,未檢出豬流感病毒N2亞型RNA

            陰性(-)

            陽性(+)

            標(biāo)本檢出豬流感病毒N2亞型RNA,未檢出豬流感病毒H3亞型RNA

            陰性(-)

            陰性(-)

            標(biāo)本中未檢出豬流感病毒H3亞型、豬流感病毒N2亞型RNA

            【檢驗方法的局限性】

            1. 當(dāng)檢測樣本中被檢核酸濃度低于本試劑盒的*檢出*可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。

            2. 被檢樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中操作方式不當(dāng)容易造成RNA降解而產(chǎn)生假陰性結(jié)果。

            3. 樣本在采集、運輸、儲存以及處理過程中發(fā)生交叉污染,則容易得到假陽性結(jié)果。

            【產(chǎn)品性能指標(biāo)】 產(chǎn)品的*檢出限為102 Copies/mL,產(chǎn)品CV≤5%。

            【注意事項】

            1. 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。

            2. 為避免RNA降解,樣本處理過程應(yīng)在0-4℃條件下操作,且完成實驗后立即上機檢測;樣本處理過程中使用的器具耗材應(yīng)經(jīng)過無核酶處理。

            3. 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。

            4. 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。

            5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在第1次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標(biāo)本準備區(qū),并單獨存放。

            6. 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標(biāo)記。

            7. 儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。

            8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。

            9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。



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