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產(chǎn)品簡(jiǎn)介
詳細(xì)介紹
雞新城疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒
EK-920-110-NDV雞新城疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒Chicken Anti-Newcastle Disease Virus (NDV) Ig’s ELISA kit
相關(guān)背景介紹：
雞新城疫（New Castle disease），由副粘病毒引起的高度接觸性傳染病。又稱亞洲雞瘟或偽雞瘟 。常呈急性敗血癥狀 。主要特征是呼吸困難、便稀、神經(jīng)紊亂、黏膜和漿膜出血。死亡率高，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害嚴(yán)重。1926年首先發(fā)現(xiàn)于印度尼西亞，不久又在英國(guó)新城發(fā)現(xiàn)，世界各國(guó)均有流行記載。有強(qiáng)毒株和弱毒株兩類。病毒分為低毒力型（即緩發(fā)型）、中等毒力型（即中發(fā)型）、強(qiáng)毒力型（即速發(fā)型）3型。多數(shù)高強(qiáng)度毒力株常屬嗜內(nèi)臟型新城疫病毒。雞科動(dòng)物都可患罹本病。家雞易感，雛雞比成年雞易感性更高?？蛇_(dá) 44℃，精神萎頓，羽毛松亂，呈昏睡狀。雞新城疫（ND）是由雞新城疫病毒引起的雞的一種高度接觸性、急性、烈性傳染病。
雞新城疫病毒抗體檢測(cè)試劑盒測(cè)試原理
酶免測(cè)定法原理遵循典型的競(jìng)爭(zhēng)抑制機(jī)制。存在于標(biāo)準(zhǔn)樣本，對(duì)照樣本和受測(cè)樣本中的未標(biāo)記的抗原與酶標(biāo)抗原結(jié)合物之間相互競(jìng)爭(zhēng)，爭(zhēng)奪與事先包被在微孔板上的數(shù)量有限的抗體發(fā)生免疫反應(yīng)的機(jī)會(huì)，然后通過洗滌和澄清去掉未被結(jié)合的物質(zhì)。洗滌后再加入酶底物，*加入終止液終止酶促反應(yīng)。吸光度可以通過酶標(biāo)儀讀取。形成的顏色的強(qiáng)度將與被檢測(cè)的樣本中的皮質(zhì)醇的濃度成反比。
應(yīng)用一套標(biāo)準(zhǔn)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，從曲線上直接讀取到受測(cè)樣本和對(duì)照樣本中的含量。
操作中的注意事項(xiàng)
1. 在使用本試劑盒之前，使用者要對(duì)本說明書有很深刻的了解，嚴(yán)格認(rèn)真按照操作指南進(jìn)行操作；
2. 為了評(píng)估結(jié)果的可靠性，對(duì)照樣品含量應(yīng)包含從高到低的各種水平；
3. 當(dāng)要用到水稀釋或重構(gòu)時(shí)，請(qǐng)使用蒸餾水或者去離子水；
4. 為減少與潛在的有害物質(zhì)接觸，在處理試劑盒及人的樣本的時(shí)候請(qǐng)戴上手套；
5. 所有試劑在使用前拿到室溫下溫和搖勻，避免反復(fù)凍融試劑和樣本；
6. 在每次運(yùn)行前確定校準(zhǔn)曲線；
7. 每次檢測(cè)時(shí)都應(yīng)該包含校準(zhǔn)液，并確保其檢測(cè)值落在可信任區(qū)間內(nèi)；
8. 不規(guī)范的程序操作，不精確的吸取，不充分的洗滌以及不正確的儲(chǔ)存都有可能導(dǎo)致測(cè)試值不在確定的范圍內(nèi)；
9. 讀取微孔板時(shí)，微孔板中如果出現(xiàn)氣泡將會(huì)影響吸光密度（OD 值），所以在讀數(shù)前請(qǐng)小心移去微孔板中的氣泡；
10. 底物溶液TMB 有很強(qiáng)的光敏感性，應(yīng)保持避光保存。如果發(fā)現(xiàn)溶液現(xiàn)藍(lán)色，可能是由于不穩(wěn)定或者已經(jīng)被污染，溶液將不能再使用；
11. 在調(diào)制底物溶液和終止液時(shí)，不要使液體接觸到吸管的金屬；
12. 為了避免污染，請(qǐng)使用一次性吸嘴吸取各種試劑和樣品，對(duì)照樣品等；
13. 切勿將不同批次的試劑組合使用，不使用任何過期產(chǎn)品；
14. 試劑盒必須當(dāng)成是危險(xiǎn)廢棄物并遵照國(guó)家有關(guān)制度進(jìn)行銷毀。
檢測(cè)流程
樣本預(yù)處理：不需要
使用前將所有試劑恢復(fù)到室溫狀態(tài)，準(zhǔn)備校準(zhǔn)液、參照樣本和待測(cè)樣本，一式幾份。一旦開始，直到測(cè)試完中間不能中斷。
1. 配制皮質(zhì)醇-HRP 結(jié)合物溶液和洗滌液。
2. 取出所需數(shù)量的微孔條。將不用的微孔條重新封裝好放回冰箱。
3. 將各種校準(zhǔn)液，參照樣品和受測(cè)樣品各吸取20μl 到相應(yīng)的已做好標(biāo)記的孔里面。
4. 吸取100μl 的結(jié)合物工作液到添加到每個(gè)孔（推薦使用多通道吸管）。
5. 室溫下在板振動(dòng)篩（大約200 轉(zhuǎn)/分鐘）下孵育45 分鐘。
6. 用300μl 稀釋的洗滌液沖洗所有的孔三次，用吸水紙吸干板上所有水分，并確保其被吸干。建議使用清洗器。
7. 吸取150μl 的TMB 底物溶液滴入到所有的孔中，并在中間間隔一段固定時(shí)間。
8. 室溫下在板振動(dòng)篩孵育15-20 分鐘或者直到校準(zhǔn)液A 呈現(xiàn)深藍(lán)色，得到理想OD值。
9. 吸取50μl 的終止液滴到所有孔，間隔時(shí)間與第7 步相同。
10. 加入終止液20 分鐘后，用微孔板讀數(shù)器讀取在450nm 濾光片下板孔的OD值。
計(jì)算
1. 計(jì)算每種校準(zhǔn)液所有重復(fù)檢測(cè)樣本的平均OD 值
2. 以OD 值為Y 軸，校準(zhǔn)液的濃度為X 軸在半對(duì)數(shù)坐標(biāo)紙上繪制校準(zhǔn)曲線。如果有免疫測(cè)試軟件，推薦使用4 參數(shù)曲線。
3. 計(jì)算待測(cè)樣本所有重復(fù)檢查樣本的平均OD 值
4. 在校準(zhǔn)曲線上直接讀出待測(cè)樣本的OD 值
5. 如果樣品的讀數(shù)超過60μg/dl,將其與校準(zhǔn)液A 以不超過1：8 的比例稀釋，所得結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)。