豬鏈球菌病（Streptococcus suis）是一種人畜共患的急性、熱性傳染病，急性型常為出血性敗血癥和腦膜炎，慢性型以關(guān)節(jié)炎、心內(nèi)膜炎、化膿性淋巴結(jié)炎為特征。其易感染性和潛伏性給畜牧業(yè)以及貿(mào)易帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失，因此豬鏈球菌的快速準(zhǔn)確鑒定對該病的預(yù)防和檢疫有著重要作用，為此本公司開發(fā)了簡單快捷的豬鏈球菌2型（SS-2）熒光定量PCR檢測試劑盒。

豬鏈球菌2型(SS-2)熒光定量PCR檢測試劑盒【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒采用探針法實(shí)時熒光 PCR 技術(shù)，設(shè)計(jì)一對豬鏈球菌2型特異性引物，結(jié)合一條特異性探針，用熒光 PCR 技術(shù)對豬鏈球菌2型的核酸進(jìn)行體外擴(kuò)增檢測，用于臨床上對病原學(xué)輔助診斷。

 

【儲存條件及有效期】

-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個月。

【適用儀器】

ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。

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1.1 DNA 提取

1) 對上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液（固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液）， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；

2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒（離心柱提取法），請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。

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2. 檢測方法的局限性

a. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；

b. 樣本提取過程中沒有控制好交叉污染，會出現(xiàn)假陽性結(jié)果；

c. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；

d. 病原體在流行過程中基因突變、重組，會導(dǎo)致假陰性結(jié)果；

f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；

g. 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。

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1.1 結(jié)果判斷

陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。

可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。

陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。

 

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