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            大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒實驗使用說明書

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              本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競爭力的不斷提升。公司在經(jīng)營中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場,較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo),本生,您信任的合作伙伴!本生試劑盒

              大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒的實驗使用說明書通常包含以下內(nèi)容,但請注意,具體說明可能因不同制造商和試劑盒版本而有所差異。以下是一個基于通用標(biāo)準(zhǔn)的概述:

              BS-8543   大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)ELISA試劑盒

              一、產(chǎn)品概述

              ?用途?:本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)的含量,僅供研究使用。

              二、實驗原理

              本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)水平。用純化的大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)捕獲抗體包被微孔板,制成固相抗體。往包被的微孔中依次加入大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT),再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物。經(jīng)過洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品中大鼠DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶(DNMT)含量。

              三、試劑盒組成

              試劑盒通常包含酶標(biāo)包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)試劑、樣品稀釋液、顯色劑A液、顯色劑B液、終止液、濃縮洗滌液等組件,具體數(shù)量和配置可能因試劑盒規(guī)格(如48孔或96孔)而異。

              四、樣本采集與處理

              ?血清?:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。

              ?血漿?:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。

              ?尿液?:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

              ?細(xì)胞培養(yǎng)上清?:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

              ?組織標(biāo)本?:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS(PH7.4)。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。

              標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實驗。若不能馬上進(jìn)行試驗,可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

              五、實驗步驟

              ?標(biāo)準(zhǔn)品的加樣?:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品。

              ?加樣?:在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液,然后再加待測樣品。加樣時將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。

              ?加酶?:每孔加入酶標(biāo)試劑(空白孔除外)。

              ?溫育?:用封板膜封板后置37℃溫育一定時間。

              ?配液?:將濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋后備用。

              ?洗滌?:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置后棄去,重復(fù)多次,拍干。

              ?顯色?:每孔加入顯色劑A和B,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色。

              ?終止?:每孔加終止液,終止反應(yīng)。

              ?測定?:以空白孔調(diào)零,在450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。

              六、注意事項

              試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡一段時間后方可使用。

              濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。

              各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

              封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。

              底物應(yīng)避光保存。

              嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)。

              七、性能與保存

              ?性能?:樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值通常高于0.95,批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15%。

              ?保存?:試劑盒應(yīng)保存在2-8℃,有效期通常為6個月。

              請注意,以上信息為通用標(biāo)準(zhǔn)概述,具體實驗時應(yīng)嚴(yán)格遵循所使用試劑盒的說明書進(jìn)行操作。


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