植物高爾基體提取試劑盒（酶法）

植物高爾基體提取試劑盒

試劑盒儲(chǔ)存條件：

【注】：2-8℃ 保存。

試劑瓶開(kāi)蓋后各組份按要求條件保存。

拆封后請(qǐng)盡快使用完!

試劑盒組成：

產(chǎn)品組成 組份編號(hào) 有效期：

規(guī)格 50T 100T

試劑

A：高爾基體提取液A 50ml 100ml 36042A

試劑

B：高爾基體提取液B 25ml 50ml 36042B

試劑

C：試劑WT 1ml 1ml 36042C

試劑

D：高爾基體保存液D 10ml 20ml 36042D

使用說(shuō)明書一年。

植物高爾基體提取試劑盒-非酶法

【注】：

有效期為試劑盒未拆封前按要求條件保存的有效期。

試劑拆封后請(qǐng)盡快使用完!

注意事項(xiàng)：

1.正式實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)選取幾個(gè)樣本做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件，取得最佳實(shí)驗(yàn)效果。

2.螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋和管內(nèi)壁上的液體離心至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)試劑損失。

3.禁止與其他品牌的試劑混用，否則會(huì)影響使用效果。

4.樣品或試劑被細(xì)菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會(huì)導(dǎo)致錯(cuò)誤的結(jié)果。

5.最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿，可重復(fù)使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。

6.實(shí)驗(yàn)后完成后所有樣品及接觸過(guò)的器皿應(yīng)按照規(guī)定程序處理。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基體。

本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能，可以用于各種下游應(yīng)用。

除了高爾基體提取試劑盒，還有細(xì)胞核提取、線粒體提取等各種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的提取試劑盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。

試劑盒以外自備儀器和試劑耗材：

植物高爾基體提取試劑盒提供全套試劑，適用于從各種新鮮植物組織樣本中提取高爾基

體。

本試劑盒提取的高爾基體具有完整的活性和功能，可以用于各種下游應(yīng)用。

除了高爾基體提取試劑盒，還有細(xì)胞核提取、線粒體提取等各種亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的提取試劑

盒以及相關(guān)的蛋白質(zhì)提取試劑盒。

儀器：

離心機(jī)

振蕩器

渦旋混勻器

Dounce勻漿器

移液器

冰箱

冰盒

試劑：PBS (pH7.4，實(shí)驗(yàn)室常用的10mM磷酸緩沖鹽溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：約含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mMNaCl和3mM KCl)

耗材：

離心管 

吸頭

手套

植物高爾基體提取試劑盒（酶法）

使用方法：

使用注意事項(xiàng)：

旋帽離心管裝的試劑在開(kāi)蓋前請(qǐng)短暫離心，將蓋內(nèi)壁上的液體甩至管底，避免開(kāi)蓋時(shí)液體灑落。

實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的所有試劑須預(yù)冷;所有器具須放-20℃冰箱預(yù)冷。整個(gè)過(guò)程須保持樣品處于低溫。

最好使用 Dounce 勻漿器勻漿，如果沒(méi)有 Dounce 勻漿器，用普通玻璃勻漿器勻漿也可，但是高 爾基體回收率會(huì)下降。 離心機(jī)轉(zhuǎn)速有相對(duì)離心力(RCF，×g)和每分鐘轉(zhuǎn)速(RPM，r/min)兩種表示方式，有些離心機(jī) 設(shè)置有RPM 和×g 顯示切換，但部分離心機(jī)沒(méi)有自動(dòng)切換功能。需要用下面的公式進(jìn)行換算： g=r×1.118×10-5×rpm2 (r 為有效離心半徑，即從離心機(jī)軸心到離心收集管底部中心位置的長(zhǎng)度，單 位為厘米) 例如: 轉(zhuǎn)速為 3000rpm，有效離心半徑為 10 cm，則相對(duì)離心力(RCF，×g)為 =10×1.118×10-5×30002=1006.2(×g)。

1. 取 200-500 mg 新鮮植物葉片組織樣本，用 PBS 洗滌干凈。

2. 用剪刀盡可能剪碎，用冷 PBS 洗滌兩次。

植物高爾基體提取試劑盒-酶法

【注】：

也可用刀片將葉片樣本切成小塊。

3. 加入 500μl 冷的試劑 A，置冰上 10 分鐘。

4. 用 Dounce 勻漿器充分勻漿 30-40 次。

【注】：

每上下一個(gè)來(lái)回為一次。

也可以用電動(dòng)勻漿機(jī)充分勻漿。

5. 將勻漿液在 4℃，1000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

6. 將上清在 4℃，3000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

7. 將上清在 4℃，6000g 力條件下離心 10 分鐘。棄沉淀，收集上清。

8. 在上清中加入 10ul 試劑WT，在 4℃，50000g 力條件下離心 20 分鐘。

【注】：

沒(méi)有 50000g 離心條件，可以降低離心力。

至少要保證 20000g 以上離心力。

降低離心力后高爾基體回收率會(huì)下降。

9. 棄上清，在沉淀中加入 500μl 冷的試劑 B，混勻。

10. 在 4℃，50000g 力條件下離心 30 分鐘。棄上清，收集沉淀。

【注】：

沒(méi)有 50000g 離心條件，可以降低離心力。

至少要保證 20000g 以上離心力。

降低離心力后高爾基體回收率會(huì)下降。

11. 沉淀用高爾基體保存液重懸保存或直接用于下游實(shí)驗(yàn)應(yīng)用。

【注】：

可以不用試劑盒中提供的保存液。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要用自己的其他緩沖液保存或直接用于下游實(shí)驗(yàn)