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            瓊脂糖預(yù)染預(yù)制膠電泳試劑盒使用中可能出現(xiàn)的問題上海惠誠生物專業(yè)解答

            時間:2022/5/30閱讀:365
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            瓊脂糖預(yù)染預(yù)制膠電泳試劑盒使用過程中可能出現(xiàn)一些問題,比如:如何選擇預(yù)制膠濃度,選擇什么體系,Marker條帶電泳清晰但樣品電泳很差,回收低,掛孔和圖像不好等原因,惠誠生物針對推出的該款預(yù)制膠進(jìn)行解答。

             

            1、如何選擇預(yù)制膠濃度?

            不同分子量對應(yīng)的預(yù)制膠濃度,實驗情況很復(fù)雜,下表僅供參考:

            圖片

            2、能不能使用其他體系?

            目前這款預(yù)制膠使用體系為TAE,不能在其他體系(如TBE/TPE)的電泳液中電泳;

             

            3、Marker條帶電泳清晰,樣品電泳很差?

            一般情況是樣本的問題,因為膠只是一個平臺,不改變核酸的結(jié)構(gòu)和形態(tài),具體解決方案如下:

            A、調(diào)整電壓(一般降低);B、減少上樣量或者稀釋;C、用新的制備樣品;D、調(diào)整PCR 的條件(如退火溫度)等等。

             

            4、為什么回收低?

            若回收低,需要調(diào)高熔膠溫度和延長熔膠時間,具體原因如下:

            A、膠是0.7cm 厚的標(biāo)準(zhǔn)膠,比用戶自配的膠在切膠的位置厚很多,因此在切膠的過程中切的膠要比自配的膠多;

            B、膠孔比用戶原來自己的孔寬一點點,用戶在切膠的過程中也會比自配的膠切的多。

            這樣的話,用戶使用他們原來的習(xí)慣,在相同的時間膠沒有*熔掉,回收量就會少很多。

             

            5、出現(xiàn)掛孔的原因?

            用戶在電泳液外面點樣,樣品因為沒有電泳液保護(hù),會很快擴(kuò)散到膠里,有可能形成掛孔。

             

            6、圖形不好怎么辦?

            預(yù)制膠因為在低溫時間長,電泳時較好比客戶經(jīng)常使用的電壓低一些,調(diào)低20-40伏特左右,會得到比較好的圖形。

             

            7、電泳是一個系統(tǒng),任何原料都可能引起變化,任何改變也需要調(diào)整。根據(jù)實際需求,選擇*優(yōu)方案。

             

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