RPA(Recombinase Polymerase Amplification)是一種等溫性擴增技術，不需要復雜的設備和高溫退火程序。RPA試劑盒中含有DNA引物、解旋酶、聚合酶、寡核苷酸等多種試劑，并且可以特異性地擴增目標DNA片段，同時還可以進行多樣本檢測。在RPA過程中，首先由引物和解旋酶使DNA雙鏈斷裂，然后DNA單鏈與引物特異性結合，并啟動DNA聚合酶進行擴增反應，擴增產物可以通過電泳、實時熒光和拉曼光譜等方法進行檢測和定量。RPA廣泛應用于基因診斷、病原體檢測、食品安全和環(huán)境監(jiān)測等領域。

RPA試劑盒的主要組成部分是酶和試劑，其中酶對溫度比較敏感，所以RPA試劑盒通常不耐高溫。高溫可導致酶的變性和活性損失，影響試劑盒的性能。

RPA試劑盒不耐高溫的主要原因

1. 核酸聚合酶

RPA試劑盒中的核酸聚合酶對溫度敏感，高溫可導致其構象改變，失去活性，無法正常復制DNA模板。

2. 重組酶Recombinase

RPA試劑盒中的重組酶也對溫度比較敏感，高溫可破壞其二級結構和三級結構，失去識別DNA和催化重組的能力。

3. 單鏈RNA素

RPA試劑盒中的單鏈RNA素結構簡單，但也對溫度敏感，高溫可破壞其結構，失去與核酸的特異性結合能力。

4. dNTP等

RPA試劑盒中的dNTP和其他試劑在高溫下也更易降解，影響實驗結果。

5. 酶的協同作用：

RPA試劑盒中多種酶之間需要協同作用實現DNA的複制和擴增，高溫可干擾各酶間的作用，破壞其間的協同效應。