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            初級(jí)會(huì)員 | 第7年

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            奧浦邁OPM-293 CD05化學(xué)成分確定的培養(yǎng)基

            時(shí)間:2024/8/27閱讀:191
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            OPM-293 CD05 是完(空)全化學(xué)成分確定(Chemically-defined)的培養(yǎng)基,不含水解物、蛋白、生長(zhǎng)因子及任 何動(dòng)物來(lái)源的成分,適合于各種亞型 HEK293 細(xì)胞的高密度培養(yǎng)及高效率瞬時(shí)轉(zhuǎn)染。

            訂購(gòu)信息:

            基礎(chǔ)培養(yǎng)基

            產(chǎn)品產(chǎn)品號(hào)類型規(guī)格描述
            OPM-293 CD05 Medium81075-001液體1000mL含L-Glutamine
            OPM-293 CD05 DPMP688293干粉10L/50L/100L含 L-Glutamine

            補(bǔ)料培養(yǎng)基

            產(chǎn)品產(chǎn)品號(hào)類型規(guī)格描述
            OPM-293 ProFeed

            F081918

            液體

            100mL

            無(wú)蛋白補(bǔ)料

            F081918-001

            液體

            1000mL

            其他 HEK293 系列培養(yǎng)基

            產(chǎn)品產(chǎn)品號(hào)類型規(guī)格描述
            OPM-293 CD03 DPM91070-010干粉10不含 L-Glutamine
            91070-050干粉50L
            OPM-293 CD03 Medium81070-001液體1000mL不含 L-Glutamine
            OPM-CD Trans293P82019液體1000mL含 L-Glutamine

            應(yīng)用范圍

            OPM-293 CD05 即適用于科研應(yīng)用,也適用于基于細(xì)胞培養(yǎng)的大規(guī)模生物藥生產(chǎn),但不可直接用于人體或作為藥 物使用。

            儲(chǔ)存運(yùn)輸方法

            儲(chǔ)存:2~8℃冷藏,干燥避光保存

            運(yùn)輸:常溫(液體)、冷藏(干粉)

            液體培養(yǎng)基配制方法

            1. 取潔凈的配制容器,建議一次性配制體積不低于 1L;

            2. 加入最終配制體積 90%的超純水或注射用水,水溫控制在 25~35°C;

            3. 稱量 19.86g/L 干粉培養(yǎng)基,緩慢加入水中攪拌 10 分鐘;

            4. 稱量 2.22g/L 碳酸氫鈉,加入水中攪拌;

            5. 緩慢加入 5N NaOH 調(diào)節(jié) pH 到 8.3~8.5,攪拌 30 分鐘,此時(shí)應(yīng)完(空)全溶解;

            6. 緩慢加入 5N HCl 將 pH 調(diào)回至 7.0;

            7. 定容到最終配液體積,繼續(xù)攪拌 5 分鐘,測(cè) pH,用 5N NaOH 或 5N HCl 將 pH 調(diào)回至 7.0;

            8. 取樣測(cè)滲透壓,加入 NaCl 調(diào)節(jié)滲透壓至 275±10mOsm/kg(滲透壓計(jì)算公式:NaCl 添加量(g)=配液體積 (L)*(275-檢測(cè)值)/31.5);

            9. 繼續(xù)攪拌 10 分鐘,無(wú)菌過(guò)濾到合適容器,2~8℃避光保存。

            干粉及液體培養(yǎng)基質(zhì)量指標(biāo)

            奧浦邁OPM-293 CD05<a class=

            培養(yǎng)條件

            溫度 37℃,濕度 80%,5~8%CO2

            搖床設(shè)置:轉(zhuǎn)速 115~125rpm(振幅 50mm)

            細(xì)胞復(fù)蘇

            1. 在 37℃水浴中快速(<2min)融化冷凍的細(xì)胞;

            2. 將冷凍管中的細(xì)胞液全部轉(zhuǎn)移到含有 30mL 預(yù)溫過(guò)的 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基的 125mL 搖瓶中;

            3. 放入 37℃,5~8% CO2,轉(zhuǎn)速 115~135rpm(振幅 50mm),濕度 80%的搖床中培養(yǎng)

            細(xì)胞傳代

            1. 將 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基放入 37℃條件下預(yù)熱 20-30min。

            2. 取細(xì)胞密度≥3×10 6 ~ 4×10 6cells/mL、活率≥95%、處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中期的細(xì)胞進(jìn)行傳代;注意:不同類 型的 HEK293 細(xì)胞可能具有不同的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期范圍。

            3. 按接種密度為 0.3×10 6 ~ 0.6×10 6cells/mL。

            4. 無(wú)菌轉(zhuǎn)移所需量的種子液至合適體積的搖瓶中,并添加所需體積的已預(yù)熱的 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基。

            5. 將搖瓶放入溫度 37℃,濕度 80%,轉(zhuǎn)速 110-150rpm(振幅 50mm),5%~8%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)搖床中進(jìn)行培養(yǎng)。 *每 2~3 天用新鮮的培養(yǎng)基按上述步驟進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

            細(xì)胞馴化

            直接接種法

            1. 對(duì)于可以直接馴化的細(xì)胞,可以從無(wú)血清培養(yǎng)基中直接接種到 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基中,接種密度參考傳 代步驟。

            2. 繼續(xù)傳代細(xì)胞,直到細(xì)胞穩(wěn)定生長(zhǎng)。

            3. 傳代幾代之后,細(xì)胞密度在接種的 3~4 天內(nèi)達(dá)到 3×10 6cells/mL、細(xì)胞活性≥95%。此時(shí),可以認(rèn)為細(xì)胞 已被馴化成功。

            奧浦邁OPM-293 CD05<a class=

            梯度馴化法

            1. 如果直接馴化效果不佳,請(qǐng)嘗試按照以下梯度馴化表格進(jìn)行操作。

            2. 選擇低代次的細(xì)胞,并確保細(xì)胞處于對(duì)數(shù)期。

            3. 使用原始培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞,并繼續(xù)使用原始培養(yǎng)基傳代 2~3 代,以實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定的細(xì)胞生長(zhǎng)。

            4. 在完(空)全使用 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基接種 3~4 天之后,VCD 應(yīng)該穩(wěn)定達(dá)到 3×10 6cells/mL,細(xì)胞活性≥95%。 此時(shí),細(xì)胞已經(jīng)馴化到 OPM-293 CD05 培養(yǎng)基中。

            轉(zhuǎn)染和瞬時(shí)表達(dá)

            轉(zhuǎn)染條件應(yīng)根據(jù)具體情況進(jìn)行優(yōu)化,可能需要通過(guò) DOE 方法確定。以下轉(zhuǎn)染條件僅供參考

            奧浦邁OPM-293 CD05<a class=

            推薦的補(bǔ)料添加方案

            奧浦邁OPM-293 CD05<a class=

            推薦轉(zhuǎn)染流程

            奧浦邁OPM-293 CD05<a class=


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