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            上?;菡\(chéng)生物科技有限公司
            初級(jí)會(huì)員 | 第7年

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            RNA 恒溫快速擴(kuò)增試劑盒熒光型說(shuō)明書(shū)

            時(shí)間:2024/10/31閱讀:157
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            【包裝規(guī)格】

            貨號(hào):WLRE8208KIT

            規(guī)格:48 份/盒

            【原理概述】

            本試劑盒基于一種常溫恒溫核酸快速擴(kuò)增技術(shù):在常溫恒溫下,特殊修飾的反轉(zhuǎn)錄酶利用特異性引物 DNA 和模板 RNA 合成cDNA 鏈,反應(yīng)體系中的重組酶、單鏈 DNA結(jié)合蛋白和 DNA 聚合酶以新合成的 cDNA鏈為模板進(jìn)行快速核酸擴(kuò)增反應(yīng)。本試劑盒在 42 oC 下,依賴(lài)核酸外切酶的作用,加入根據(jù)模板設(shè)計(jì)的特異的分子探針,使用熒光監(jiān)測(cè)設(shè)備能實(shí)現(xiàn)對(duì)目標(biāo)片段擴(kuò)增過(guò)程的實(shí)時(shí)監(jiān)控。適用于實(shí)驗(yàn)室級(jí)別的 RNA 擴(kuò)增以及其他檢測(cè)用途的 RNA 擴(kuò)增使用。

            【產(chǎn)品特點(diǎn)】

            本試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、反應(yīng)時(shí)間短(僅需 20 min)等優(yōu)點(diǎn),反應(yīng)組分為干粉狀態(tài),操作簡(jiǎn)便,易于保存。

            可適用于各種品牌的熒光定量 PCR 儀,恒溫?zé)晒鈹U(kuò)增儀器等熒光檢測(cè)設(shè)備。

            【引物設(shè)計(jì)】

            建議使用長(zhǎng)度在 30-35 bp 的引物,引物過(guò)短會(huì)影響擴(kuò)增速度和檢測(cè)靈敏度;引物設(shè)計(jì)避免形成二級(jí)結(jié)構(gòu)而影響擴(kuò)增;擴(kuò)增子長(zhǎng)度建議在 150-500 bp。

            【熒光探針設(shè)計(jì)】

            探針序列不與特異性引物識(shí)別位點(diǎn)重疊,長(zhǎng)度為 46-52 nt,序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。探針共有四個(gè)修飾位點(diǎn):距離 5’端的≈35 nt 的中部位置標(biāo)記一個(gè) dSpacer(四氫呋喃,THF),作為核酸外切酶的識(shí)別位點(diǎn);THF 位點(diǎn)的上游標(biāo)記一個(gè)熒光基團(tuán),下游標(biāo)記一個(gè)粹滅基團(tuán),兩個(gè)基團(tuán)的間距為2-4 nt;THF 距離3’末端≥15 nt,并且 3’末端標(biāo)記一個(gè)修飾基團(tuán),例如胺基、磷酸基團(tuán)或 C3-Spacer。

            原理1.jpg

            原理2.jpg

            【試劑盒組成】

            組成

            含量

            A buffer

            1.6 mL×1

            B buffer

            150 μL×1

            試劑

            48

            使用說(shuō)明書(shū)

            1

            注:考慮到核酸降解問(wèn)題,RNA 系列產(chǎn)品不提供正對(duì)照模板和引物探針。

            【試劑盒儲(chǔ)存】

            1.運(yùn)輸溫度:≤20oC的恒溫環(huán)境;

            2.儲(chǔ)存條件:儲(chǔ)存溫度≤-20°C(±5°C)恒溫環(huán)境,避光保存,避免重壓、反復(fù)凍融;

            3.產(chǎn)品有效期:14個(gè)月;

            4.生產(chǎn)日期見(jiàn)外包裝。

            【注意事項(xiàng)】

            1. 由于試劑盒靈敏度非常高,在進(jìn)行反應(yīng)時(shí)請(qǐng)注意避免核酸污染,并設(shè)置空白對(duì)照;

            2.使用時(shí)請(qǐng)取出實(shí)驗(yàn)所需的 MIRA 反應(yīng)單元的數(shù)量,剩余部分請(qǐng)置于存儲(chǔ)條件下。


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            DNA恒溫快速擴(kuò)增試劑盒(基礎(chǔ)型)
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