傳統(tǒng)流式細胞術(shù)在蛋白質(zhì)互作和低豐度蛋白檢測方面能力受限。我們將流式細胞術(shù)與Duolink®鄰位連接技術(shù)（PLA）結(jié)合在一起，實現(xiàn)了蛋白互作流式分析。Duolink® flowPLA檢測試劑盒通過增強靈敏度可以檢測細胞群中的低豐度靶蛋白。該實驗方案易于操作，可適配任意流式細胞儀來提供可直接發(fā)表的實驗結(jié)果。
Duolink® flowPLA檢測試劑盒可進行40次反應，每次需100,000細胞溶于100 µL反應液中。試劑盒組分包含：
1.連接原液(5X) – 稀釋配制1X連接緩沖液
2.連接酶(1 U/μL) – 添加配制連接液
3.擴增原液(5X) – 稀釋配制1X擴增緩沖液
4.聚合酶(10 U/μL) – 添加配制擴增液
5.檢測原液(5X) – 稀釋配制1X檢測緩沖液
Duolink®鄰位連接檢測（PLA）實現(xiàn)了對內(nèi)源性蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（PPI）和翻譯后修飾的研究，為單一事件提供了可通過顯微鏡或流式細胞儀進行可視化的熒光信號。為了實現(xiàn)對蛋白質(zhì)間相互作用的研究，Duolink® PLA技術(shù)使用了一對帶有寡核苷酸標記的抗體，當它們相距在40nm以內(nèi)時，可進行滾圈擴增并在添加標記探針后產(chǎn)生特異性熒光信號。
Duolink® PLA可提供四種不同顏色的熒光用于流式細胞儀和顯微鏡檢測，對細胞中多組蛋白質(zhì)間的相互作用實現(xiàn)可視化。借助Duolink® PLA技術(shù)的放大能力和諸多優(yōu)勢，發(fā)現(xiàn)任何科研突破機會：
1.可視化蛋白互作——包括穩(wěn)定和瞬時兩種
2.可視化翻譯后修飾
3.檢測內(nèi)源蛋白——無需表達或遺傳操作
4.高特異性——使用兩種抗體/探針消除假陽性
5.無需特殊設備——可提供基于標準免疫熒光和流式細胞術(shù)的方法
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