細(xì)菌中的蛋白質(zhì)表達(dá)是迄今為止制備穩(wěn)定同位素富集蛋白質(zhì)樣品的常用方法。大腸桿菌是表達(dá)重組蛋白常用的生物體，是一種培養(yǎng)時(shí)間短的宿主。大腸桿菌能夠使用簡單的分子技術(shù)進(jìn)行直接的基因操作，并且細(xì)胞對氘表現(xiàn)出良好的耐受性，從而可以使用13 C、 15 N 和2 H
在厭氧條件下，大腸桿菌可以使用葡萄糖、乙酸鹽和甘油作為其碳源以及銨鹽作為其氮源來合成所有 20 種必需氨基酸。使用標(biāo)記的基本介質(zhì)試劑，例如氧化氘、 15 N 銨鹽、 13 C 6、D 7或13 C 6 /D 7標(biāo)記的葡萄糖，可以直接生產(chǎn)均勻標(biāo)記的蛋白質(zhì)樣品。
使用相應(yīng)的標(biāo)記試劑獲得均勻的標(biāo)記
I SOGRO 是一種源自藻類裂解物的復(fù)雜粉末狀豐富培養(yǎng)基，旨在增強(qiáng)細(xì)菌中的蛋白質(zhì)表達(dá)。 ISOGRO 粉末具有13 C、 15 N 和2 H 標(biāo)記的各種組合，可用作獨(dú)立培養(yǎng)基或基本培養(yǎng)基的補(bǔ)充，以提高蛋白質(zhì)產(chǎn)量。
A。 p38 生長的 SDS-PAGE。數(shù)據(jù)由美國大學(xué)化學(xué)/生物化學(xué)系 Jeffrey W. Peng 博士提供美國印第安納州圣母院。 b. pLysS 中的心肌肌鈣蛋白 cTnC(1-89)。細(xì)胞在 37°C 搖瓶中生長。紅色曲線是 ISOGRO 補(bǔ)充的最小介質(zhì)，黑色曲線是單獨(dú)的最小介質(zhì)。
如果使用大腸桿菌無法成功進(jìn)行蛋白質(zhì)表達(dá)，則可以考慮其他選擇，例如昆蟲細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或無細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)。
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