AimPlex™ 多重檢測技術(shù)利用按大小和不同熒光強(qiáng)度水平區(qū)分的多個珠群。 AimPlex 技術(shù)具有 4 和 5 微米兩種尺寸的珠子，每種珠子尺寸（4S 和 5S）有 12 個熒光強(qiáng)度級別，只需15 µL 樣品即可在一次反應(yīng)中同時測量多達(dá) 24 種分析物。使用配備藍(lán)色 488nm 和紅色 635nm 激光器或僅配備 488nm 激光器的標(biāo)準(zhǔn)流式細(xì)胞儀測定反應(yīng)中的珠群。珠分類染料的最大發(fā)射波長為 700 nm。
與夾心 ELISA 的原理類似，每個珠群與特定的捕獲抗體結(jié)合，捕獲樣品中的目標(biāo)蛋白質(zhì)，例如細(xì)胞因子。通過針對蛋白質(zhì)二級表位的生物素化抗體檢測捕獲的分析物的量，然后進(jìn)行鏈霉親和素-R-藻紅蛋白處理。在配備有 488nm 激光器的流式細(xì)胞儀上對珠子上的 R-藻紅蛋白的熒光強(qiáng)度進(jìn)行定量，并使用 PE 通道檢測器進(jìn)行測量。通過將熒光信號與由已知濃度的蛋白質(zhì)分析物的系列稀釋產(chǎn)生的標(biāo)準(zhǔn)曲線的信號進(jìn)行比較，可以獲得樣品中感興趣的蛋白質(zhì)的濃度。
測定程序包括 60 分鐘抗原和捕獲抗體綴合珠孵育步驟、30 分鐘生物素化檢測孵育步驟和 20 分鐘鏈霉親和素-PE 孵育步驟。每次孵育步驟后通過流通式過濾器底部微孔板清洗珠子可提供最高的信噪比。
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