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            使用熒光核酸染色劑 LUCS 13 對活細(xì)胞進(jìn)行染色

            閱讀:729      發(fā)布時(shí)間:2024-3-15
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            LUCS 13 是一種可滲透細(xì)胞的核酸染料,在與核酸結(jié)合后呈現(xiàn)綠色熒光。該染料具有高熒光產(chǎn)量,且結(jié)構(gòu)與 SYTO™13 染料相同。

            LUCS 13 用于對活的和死的真核細(xì)胞以及革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細(xì)菌中的 DNA 和 RNA 進(jìn)行染色。染料被 488 nm 的藍(lán)色激光激發(fā)。其熒光發(fā)射在熒光素通道中檢測到,與 DNA 結(jié)合時(shí)峰值為 509 nm,與 RNA 結(jié)合時(shí)峰值為 514 nm。

            該染料可用于同時(shí)標(biāo)記細(xì)胞不可滲透的核標(biāo)記物(例如 YoDi-3),以使用熒光顯微鏡和流式細(xì)胞術(shù)評估細(xì)胞活力。

            協(xié)議

            確切的方案取決于具體的細(xì)胞類型和實(shí)驗(yàn)任務(wù)。一般來說,可以描述如下:

            1. 準(zhǔn)備 50 µM LUCS 13 儲(chǔ)備溶液。為此,將 990 µl 去離子水添加到 10 µl 5 mM LUCS 13 溶液中。儲(chǔ)備液可以等分并冷凍以供長期儲(chǔ)存。

            2. 要制備 1 µM LUCS 13 工作溶液,請將 20 µl 50 µM LUCS13 庫存添加到 980 µl PBS 中。

            3. 以合適的方式小心地從生長表面去除貼壁細(xì)胞。對于懸浮細(xì)胞,從下一點(diǎn)開始工作。

            4. 用冷 PBS(pH 7.4)清洗細(xì)胞一次。 300 g離心 5 分鐘獲得種子細(xì)胞

            5. 將細(xì)胞在 1 ml 1 μM LUCS 13 工作溶液中于 37°C 孵育 30 分鐘。

            6. 300 g離心 5 分鐘去除染料溶液 。

            7. 用 PBS 清洗細(xì)胞一次。

            8. (可選)如有必要,可以將細(xì)胞在含 3.7% 甲醛的 PBS 中固定 15 分鐘,用 PBS 洗滌,然后用另一種染色劑重新染色。

            重要的

            • 處理 LUCS 13 溶液時(shí)請使用塑料瓶,因?yàn)橄♂尩娜玖峡赡軙?huì)粘在玻璃上。

            • 使用無磷酸鹽緩沖液(例如鹽水中的 15 mM HEPES)可獲得更明亮的染色結(jié)果。

            • 在開始實(shí)驗(yàn)之前,測試幾種染料濃度范圍從 10 nM 到 5 µM,以確定最佳的染料稀釋度。染色結(jié)果受許多因素影響:生長培養(yǎng)基、細(xì)胞密度、其他細(xì)胞類型的存在、染色持續(xù)時(shí)間等。



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