（L-丙氨酸:2氧代戊二酸氨基轉(zhuǎn)移酶；2.6.1.2谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）也稱為丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶。它催化以下反應(yīng):GPT L-丙氨酸+α-酮戊二酸-》丙酮酸+L-谷氨酸轉(zhuǎn)氨反應(yīng)在中間代謝中起重要作用。轉(zhuǎn)氨酶的催化活性需要磷酸吡哆醛作為輔酶。GPT存在于許多動植物組織中，在哺乳動物的心臟和肝臟中活性尤其高。這種酶在哺乳動物組織中以兩種不同的同工酶形式存在，線粒體形式和細胞質(zhì)形式。來自豬心的GPT已被廣泛研究。它的分子量為10萬。
在pH 7.5和25℃的磷酸鉀緩沖液中，催化1微摩爾α-酮戊二酸轉(zhuǎn)化為L-谷氨酸的酶量
由NADH氧化引起的340 nm處吸光度的降低與GPT的催化活性成正比。
組分：
0.1 M磷酸鉀緩沖液，pH 7.5。
緩沖液中的1.15M L-丙氨酸（103毫克/毫升）。
緩沖液中的0.31Mα-酮戊二酸（45毫克/毫升）。
蒸餾水中的0.008 M NADH二鈉鹽（5毫克/毫升）。準備新鮮的。
乳酸脫氫酶（LDH），緩沖液中250 U/ml?；炃傲⒓礈蕚湫迈r樣品。
酶（GPT）溶液。在緩沖液中制備，使最終濃度為0.1-0.2 U/ml。必須在化驗前立即制備新鮮樣品。
PROCEDURE
將分光光度計（配有條形記錄儀和溫度控制裝置）設(shè)置在340 nm和25°c。
2.向比色皿移液管中加入所示量的以下試劑: 左旋丙氨酸2.60毫升 α-酮戊二酸鹽0.10毫升 NADH 0.10毫升 乳酸脫氫酶0.10毫升 混合并在分光光度計中孵育5分鐘以達到溫度平衡，然后記錄340 nm處的空白率。
3.通過向比色皿中加入0.1毫升酶（GPT）溶液來啟動反應(yīng)。
4.記錄5-8分鐘內(nèi)340 nm處吸光度的下降率。
5.計算(delta)E340nm納米/分鐘
5
立即詢價
您提交后，專屬客服將第一時間為您服務(wù)