帶有經(jīng)驗(yàn)證引物的all-in-One qPCR混合物提供通用的qPCR反應(yīng)條件和可靠的定量PCR數(shù)據(jù)。聯(lián)合開發(fā)和共同優(yōu)化的一體化qPCR混合物和基因特異性引物提供了您所需的全部?jī)?yōu)勢(shì)，而沒有您預(yù)期的任何高成本:
- 統(tǒng)一的反應(yīng)條件減少了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)時(shí)間，從而能夠更早提交期刊論文
- 即使是低拷貝基因也具有高擴(kuò)增效率和靈敏度，這意味著每次都可以進(jìn)行可靠的定量
- 不存在非特異性擴(kuò)增*和引物二聚體*確保了數(shù)據(jù)的可再現(xiàn)性和可發(fā)布性
一體化qPCR混合物使用高保真熱啟動(dòng)聚合酶、優(yōu)化的反應(yīng)緩沖液和高質(zhì)量dNTPs，即使從低拷貝RNA（cDNA）或DNA物種中也能進(jìn)行特異性和靈敏的擴(kuò)增（圖1）。
圖一。使用一體化qPCR主混合物進(jìn)行qPCR反應(yīng)。使用GeneCopoeia全合一cDNA合成試劑盒對(duì)來自MCF-7細(xì)胞的1微克總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。將RT反應(yīng)物稀釋至1毫克至1毫克RNA /升。使用GeneCopoeia All-in-One qPCR混合物（A）將1升稀釋的RT反應(yīng)物用于隨后的qPCR中35個(gè)循環(huán)。最終產(chǎn)物在2%瓊脂糖凝膠上進(jìn)行電泳（B）。
圖二。2X All-in-One qPCR混合物的擴(kuò)增效率和檢測(cè)靈敏度通過標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行評(píng)估，該標(biāo)準(zhǔn)曲線由5×10的質(zhì)粒DNA梯度稀釋而成6到5個(gè)分子。擴(kuò)增和解鏈曲線的峰值表明，使用All-in-One qPCR Mix可以獲得非常高的靈敏度，可以檢測(cè)低至5個(gè)分子。同時(shí)，每個(gè)濃度之間良好的線性關(guān)系也顯示了高擴(kuò)增效率。
一體化qPCR驗(yàn)證引物完成任務(wù)
使用GeneCopoeia的precision qPCR消除無休止的調(diào)整和優(yōu)化。只需添加多合一底漆并開始。一體式qPCR人-小鼠或大鼠特異性引物由專有算法設(shè)計(jì)并經(jīng)過驗(yàn)證?精密性能。引物驗(yàn)證包括解鏈曲線，以確保擴(kuò)增正確的靶DNA（圖2）。
當(dāng)與多合一SYBR結(jié)合使用時(shí)®Green qPCR Mix，多合一引物在定量PCR檢測(cè)中提供可靠且可重現(xiàn)的高性能。
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| 放大曲線 |
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| 熔化曲線 | 瓊脂糖凝膠電泳驗(yàn)證結(jié)果 |
圖三。45對(duì)基因特異性All-in-One qPCR引物經(jīng)過實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，可產(chǎn)生單一解離曲線峰，并對(duì)目標(biāo)基因產(chǎn)生正確大小的單一擴(kuò)增。將包含來自10種不同人類組織（肺、肝、睪丸、卵巢、脾、腦、胎盤、胰腺、心臟和乳腺）的總RNA的逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的cDNA庫用作qPCR驗(yàn)證模板。使用0.2 M引物和2X多合一qPCR混合物進(jìn)行qPCR。將反應(yīng)物孵育10分鐘。在95℃下，隨后在10秒內(nèi)進(jìn)行40次95℃的循環(huán)。；60攝氏度20秒。72攝氏度15秒。使用Bio-Rad iQ5儀器。最后一個(gè)循環(huán)結(jié)束時(shí)，溫度從72℃升至95℃，形成一條熔化曲線。顯示了10個(gè)樣品的擴(kuò)增曲線、解鏈曲線和瓊脂糖凝膠電泳（奇數(shù)泳道中陽性和偶數(shù)泳道中無模板對(duì)照（NTC）的驗(yàn)證結(jié)果）。
*當(dāng)一體式驗(yàn)證PCR引物和PCR混合物一起使用時(shí)，確保非特異性擴(kuò)增和引物二聚體的缺失。自動(dòng)驗(yàn)證適用于人類、小鼠和大鼠的引物。查詢其他物種的驗(yàn)證。
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