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            目錄:上海牧榮生物科技有限公司>>實(shí)驗(yàn)試劑>>抗原抗體>> CL110001VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系

            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系
            • VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系
            參考價(jià) 面議
            具體成交價(jià)以合同協(xié)議為準(zhǔn)
            參考價(jià) 面議
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            • 品牌 其他品牌
            • 型號(hào) CL110001
            • 廠商性質(zhì) 代理商
            • 所在地 上海市
            屬性

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            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系,產(chǎn)品編碼:CL110001。
            是人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞HEK 293的亞克隆,經(jīng)過(guò)基因編輯改進(jìn)后篩選出的單克隆細(xì)胞株,具備高細(xì)胞活性、低細(xì)胞凋亡水平、可高度轉(zhuǎn)染并高水平表達(dá)病毒蛋白質(zhì)等特性。


            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系,產(chǎn)品編碼:CL110001。

            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系,

            ViralStarsTM  Lentivirus Packaging Cell Line



            01/產(chǎn)品概述


            慢病毒是一種逆轉(zhuǎn)錄病毒,能使外源基因整合入宿主細(xì)胞的基因組,實(shí)現(xiàn)外源基因穩(wěn)定、長(zhǎng)期的表達(dá),比一般的逆轉(zhuǎn)錄病毒具有更高的滴度和更廣的宿主范圍。攜帶外源基因的慢病毒載體與包裝載體(產(chǎn)生病毒顆粒所需的輔助蛋白)一同轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞,即可進(jìn)行病毒的包裝。包裝好的慢病毒為假型病毒(病毒感染目的細(xì)胞后不會(huì)再感染其他細(xì)胞,也不會(huì)利用宿主細(xì)胞產(chǎn)生新的病毒顆粒,慢病毒中的毒性基因已被剔除并被外源性目的基因所取代),分泌到細(xì)胞外的培養(yǎng)基中,經(jīng)過(guò)離心取得上清液后進(jìn)行慢病毒濃縮,濃縮后的慢病毒液可以直接用于宿主細(xì)胞的感染,目的基因進(jìn)入到宿主細(xì)胞后,經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄,整合到基因組,從而實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主細(xì)胞中的表達(dá)(下圖)。



            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系


            要充分利用慢病毒包裝系統(tǒng)產(chǎn)生高滴度的慢病毒顆粒,就需要宿主細(xì)胞系具備易于轉(zhuǎn)染并且可以高水平表達(dá)病毒蛋白質(zhì)的特性。我們的ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line經(jīng)過(guò)了克隆篩選,可以充分滿足這些需求。當(dāng)與我們優(yōu)質(zhì)的ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110)高滴度慢病毒包裝試劑盒配合使用時(shí),可以獲得更高的慢病毒滴度(高達(dá)108 TU/mL)。ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line是人胚胎腎細(xì)胞轉(zhuǎn)化細(xì)胞HEK 293的亞克隆,經(jīng)過(guò)基因編輯改進(jìn)后篩選出的單克隆細(xì)胞株,具備高細(xì)胞活性、低細(xì)胞凋亡水平、可高度轉(zhuǎn)染并高水平表達(dá)病毒蛋白質(zhì)等特性。




            02/產(chǎn)品組分

            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系



            03/保存條件


            為確保細(xì)胞活力,細(xì)胞產(chǎn)品接收后應(yīng)立即進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)及后續(xù)操作(詳見(jiàn)05/實(shí)驗(yàn)步驟)。




            04/產(chǎn)品特點(diǎn)


            2 高細(xì)胞活性、低細(xì)胞凋亡水平

            2 高度易于轉(zhuǎn)染

            2 高水平表達(dá)重組慢病毒




            05/實(shí)驗(yàn)步驟


            一、ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line細(xì)胞傳代

            1. 待細(xì)胞密度達(dá)90% 左右,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。棄去舊培養(yǎng)基,用PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

            2. 加入適量胰酶消化液,置于37℃培養(yǎng)箱中消化細(xì)胞約1-2分鐘,顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若觀察到大部分細(xì)胞變圓并脫落,則迅速拿回操作臺(tái),加入與胰酶等量的*培養(yǎng)基(DMEM,10% FBS,1% 雙抗)終止消化。

            3. 輕輕吹打細(xì)胞,使細(xì)胞*脫落后吸出,1000 rpm離心5分鐘,棄去上清液,用新鮮的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。

            4. 將細(xì)胞懸液按合適的比例(推薦1:4-1:5)接種到新的培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶中,置于37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。


            二、ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line細(xì)胞凍存

            1. 選擇處于指數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞,按照常規(guī)方法收集細(xì)胞于離心管中。

            2. 1000 rpm,離心5分鐘,收集培養(yǎng)細(xì)胞沉淀,棄上清液。

            3. 加入適量4℃預(yù)冷的LeapWal Cell Freezing Medium (1x)(PZ110R) 重懸細(xì)胞,制成細(xì)胞懸液。

            ? 按照細(xì)胞密度和所用細(xì)胞凍存管的尺寸計(jì)算所需凍存液的量,推薦凍存密度:1x106 至5x106 cells/mL。

            4. 將細(xì)胞懸液分裝至已標(biāo)記的凍存管中,建議每管1mL或1.5mL。

            5. 直接將細(xì)胞凍存管放入-80℃超低溫冰箱中,可長(zhǎng)期冷凍保存。如果想放入液氮中長(zhǎng)期保存,需先放入-80℃冰箱至少12小時(shí),方可移至液氮罐中長(zhǎng)期保存。


            三、ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line細(xì)胞復(fù)蘇

            1. 在15 mL離心管中加入5-10 mL平衡至室溫的*培養(yǎng)基。

            2. 從-80℃冰箱/液氮中取出凍存的細(xì)胞,立即放入37℃水浴鍋或其他細(xì)胞復(fù)蘇設(shè)備中,迅速解凍。

            3. 將凍存管中的細(xì)胞懸液逐滴轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的含*培養(yǎng)基的離心管中,1000 rpm,離心5分鐘,收集細(xì)胞沉淀,棄上清(操作時(shí)小心,切勿將細(xì)胞沉淀移去)。

            4. 加入適量平衡至室溫的*培養(yǎng)基重懸細(xì)胞,接種到事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)容器中,輕輕搖晃培養(yǎng)容器,使細(xì)胞分布均勻。

            5. 培養(yǎng)5-16 h后,觀察細(xì)胞狀態(tài),可視情況更換預(yù)熱的新鮮*培養(yǎng)液,之后進(jìn)行常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)及傳代。




            06/適用范圍


            ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line經(jīng)過(guò)了基因編輯及單克隆篩選,具備高細(xì)胞活性、低細(xì)胞凋亡水平、可高度轉(zhuǎn)染并高水平表達(dá)病毒蛋白等特性,兼容所有慢病毒包裝體系。




            07/注意事項(xiàng)


            1. 該產(chǎn)品與我們優(yōu)質(zhì)的ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110)高滴度慢病毒包裝試劑盒配合使用時(shí),可以獲得更高的慢病毒滴度(高達(dá)108 TU/mL)。

            2. 為了您的健康安全,請(qǐng)規(guī)范操作,穿戴實(shí)驗(yàn)服與手套開(kāi)展實(shí)驗(yàn)。

            3. 所有慢病毒操作均需在BSL2級(jí)生物安全柜中進(jìn)行。

            4. 本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及治療。




            08/實(shí)驗(yàn)案例分析


            1. 提前一天使用10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line(CL110001)及其它兩種常用HEK 293包裝細(xì)胞系(HEK293T、293FT),待細(xì)胞密度為75% 左右開(kāi)始包裝慢病毒。

            2. 使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110-10)進(jìn)行慢病毒包裝。取3個(gè)2 mL EP管,分別加入10 μL慢病毒包裝輔助質(zhì)?;旌衔铮≒ackage Plasmid Mix),2.5 μL表達(dá)GFP的對(duì)照質(zhì)粒(Control Plasmid),輕輕混合,加入32 μL PolyShooter轉(zhuǎn)染試劑與質(zhì)?;旌希覝胤跤?分鐘。

            3. 往上述混合物中加入1.8 mL無(wú)血清無(wú)雙抗的DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基,輕輕混勻,在室溫下靜置30分鐘,形成轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物。

            4. 將上述1.8 mL轉(zhuǎn)染試劑-核酸復(fù)合物輕輕地逐滴均勻加入10 cm皿慢病毒包裝細(xì)胞中,輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿混勻,做好標(biāo)記,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)產(chǎn)毒。

            5. 轉(zhuǎn)染24 h后,棄去初始病毒上清液,加入10 mL新鮮的*培養(yǎng)基(DMEM +10% FBS)至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

            6. 轉(zhuǎn)染48 h后,收集病毒上清液,再加入10 mL新鮮的*培養(yǎng)基(DMEM +10% FBS)至10 cm細(xì)胞培養(yǎng)皿中,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

            7. 轉(zhuǎn)染72 h后,進(jìn)行二次病毒上清液收集,與48 h收集的上清液混合后,300xg離心10分鐘以除去細(xì)胞碎片,0.22 μm濾器過(guò)濾,使用ViralStars LC Lentivirus Concentration Solution慢病毒濃縮試劑盒(LC110R)進(jìn)行20倍濃縮,使用1 mL ViralStars LS Lentivirus Storage Solution(LS110R)分別重懸三組慢病毒顆粒。

            8. 孔稀釋法測(cè)定病毒滴度。

            (1) Day1:準(zhǔn)備細(xì)胞

            對(duì)生長(zhǎng)狀態(tài)良好的293T細(xì)胞消化計(jì)數(shù)后稀釋至?1-3x105個(gè)?/mL?,加入96孔板,100?μL/孔(1-3x104個(gè)?/孔),每?種慢病毒設(shè)6個(gè)梯度孔,置于37℃,5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

            (2) Day2:病毒的稀釋與感染

            在EP管中做10倍梯度稀釋?zhuān)B續(xù)6個(gè)稀釋梯度。稀釋方法如下:準(zhǔn)備6個(gè)?菌EP管,每個(gè)EP管中加?90μL 新鮮的*培養(yǎng)基(含10 μg/mL polybrene),取待測(cè)定病毒液10 μL加?到第?個(gè)EP管中(標(biāo)記10 μL),混勻后取10 μL病毒稀釋液加?到第?個(gè)EP管中(標(biāo)記1 μL),以此類(lèi)推,直到稀釋到最后?管。棄去96孔板中原有的培養(yǎng)基,將稀釋好的病毒依次加入孔中,并做好標(biāo)記,??操作,不要吹起細(xì)胞,置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)16 h。



            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系



            (3) Day3:棄病毒,換液

            吸去含病毒的培養(yǎng)基,在每個(gè)孔中再加入?100 μL?預(yù)熱的新鮮*培養(yǎng)基。

            (4) Day4:熒光計(jì)數(shù)與滴度計(jì)算

            感染36-48 h后,采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)熒光比例合適(10%-50%)的連續(xù)兩個(gè)梯度進(jìn)行陽(yáng)性細(xì)胞統(tǒng)計(jì),計(jì)算出病毒滴度,實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖2所示。



            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系


            圖2: ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line慢病毒包裝細(xì)胞系可制備出更高滴度的慢病毒顆粒。


            我們使用ViralStars LP Lentivirus Packaging Kit(LP110-10)進(jìn)行慢病毒包裝,比較ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line和其它兩種常用HEK 293包裝細(xì)胞系的病毒制備能力,ViralStars Lentivirus Packaging Cell Line明顯優(yōu)于其他細(xì)胞系——所獲得的病毒滴度比293FT細(xì)胞高出10倍,比親代HEK 293細(xì)胞系高出26倍。



            09/其他相關(guān)產(chǎn)品

            VirusStars 慢病毒包裝細(xì)胞系

            上海牧榮生物科技有限公司

            1. 國(guó)內(nèi)試劑耗材經(jīng)銷(xiāo)代理。

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