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共價(jià)結(jié)合型果膠（CSP）含量測試盒
微量法 100管/48樣
正式測定前取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等，是許多高等植物細(xì)胞壁中含量豐富的多糖成分，其特*的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以Ca2+橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián)，通過不同的抽提方法可以提取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）。
測定原理：
利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價(jià)結(jié)合型果膠（CSP），采用咔唑比色法測定果膠含量。果膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，生成物質(zhì)在530 nm處有最大吸收峰。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、80％乙醇、丙酮、濃硫酸（不允許快遞）、研缽和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體100mL× 1瓶，4℃保存。
試劑二：液體100mL× 1瓶，4℃保存。
試劑三：標(biāo)準(zhǔn)液1mL× 1支，4℃保存。
試劑四：液體5mL× 1瓶，4℃保存；
樣品的前處理：
細(xì)胞壁的提?。喝〖s0.3g樣本，加入1mL 80％乙醇，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁，加入1mL試劑一（去除淀粉）浸泡15小時(shí)，4000g 25℃離心10min，棄上清，將沉淀干燥，稱重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）。
CSP的提?。悍Q取烘干的CWM 3mg，加入1mL試劑二，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬，可先研碎后再加入1mL試劑二勻漿，或者用勻漿器勻漿)。8000g 4℃離心10min，取上清液待測。
測定步驟：
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至530nm處，蒸餾水調(diào)零；試劑三和試劑四37℃預(yù)熱10min以上；
2、操作表：
試劑名稱（µL） | 空白管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | 對照管 | 測定管 |
待測樣本 | 50 | 50 | ||
試劑三 | 50 | |||
蒸餾水 | 50 | 50 | ||
試劑四 | 50 | 50 | 50 |
混勻
濃硫酸 | 400 | 400 | 400 | 400 |
混勻，95℃水浴5min后，冷卻至室溫，取200µL 至微量石英比色皿或96孔板中，530nm處讀取吸光值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對照管和測定管吸光值分別記為A1、A2、A3和A4。若A大于2，需將待測樣本用蒸餾水稀釋（可稀釋10倍或20倍）?？瞻坠芎蜆?biāo)準(zhǔn)管只要做一管，每個(gè)測定管需設(shè)一個(gè)對照管。
CSP含量計(jì)算：
CSP含量(mg /g 干重)= (C標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù)=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)
C標(biāo)準(zhǔn)：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1mL； W：樣本干重，g。
注意：*低檢測限為50μg /g 干重
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共價(jià)結(jié)合型果膠（CSP）含量測試盒
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