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更新時(shí)間：2024-05-07 13:38:33瀏覽次數(shù)：488評(píng)價(jià)
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尿酸(UA)含量測(cè)試盒
微量法100T/96S
注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義：
UA是鳥(niǎo)類(lèi)和爬行類(lèi)動(dòng)物的主要代謝產(chǎn)物，正常人體尿液中產(chǎn)物主要為尿素，含少量尿酸。此外，UA還是重要的抗氧化劑，能清除超氧化物，羥自由基等。體內(nèi)UA生成量和排泄量不平衡會(huì)導(dǎo)致多種疾病的發(fā)生。例如，血中UA升高會(huì)引起痛風(fēng)、腎功能損害和動(dòng)脈硬化，相反UA降低會(huì)引起惡性貧血，在臨床診斷上具有重要的意義。
測(cè)定原理：
尿酸酶能催化UA生成尿囊素，CO2及H2O2，H2O2 氧化亞鐵氰*鉀中的Fe2+ 生成Fe3+ ，F(xiàn)e3+進(jìn)一步與酚和4-氨基安替比林縮合生成紅色醌類(lèi)化合物，在505nm下有特征吸收峰，測(cè)定反應(yīng)體系505nm的吸收值，可計(jì)算尿酸的含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
恒溫水浴鍋、可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體20mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：
A：用于標(biāo)準(zhǔn)管和測(cè)定管，粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加13mL緩沖液溶解。
B：用于空白管，粉劑1瓶，4℃避光保存，使用前加7 mL緩沖液溶解。
試劑二：粉劑1管，4℃避光保存，使用前加2mL蒸餾水溶解，60℃加熱溶解。
樣品的制備：
動(dòng)植物組織：建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL生理鹽水或蒸餾水，進(jìn)行冰浴勻漿，然后8000g，4℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。
血清，培養(yǎng)液：直接檢測(cè)。
測(cè)定操作表：
分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至505nm。
操作表
標(biāo)準(zhǔn)管 | 空白管 | 測(cè)定管 | |
試劑一（μL） | A, 60 | B, 60 | A, 60 |
H2O（μL） | 180 | 240 | 180 |
試劑二（μL） | 60 | ||
樣品（μL） | 60 | ||
混勻，37℃水浴30min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中，測(cè)定505nm處各管吸光值，標(biāo)準(zhǔn)管和空白管只需做一管。 | |||
UV含量計(jì)算公式：
1. 組織：
（1）按樣本重量計(jì)算
尿酸含量（μmol/g 鮮重）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷ （W÷V樣總）=0.5×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷ W
（2）按樣本蛋白濃度計(jì)算
尿酸含量（μmol/mg prot）=C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷ Cpr =0.5×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）÷Cpr
尿酸（μmol/L）= C標(biāo)準(zhǔn)品×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）×103
=500×（A測(cè)定管－A空白管）÷（A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管）
C標(biāo)：標(biāo)準(zhǔn)品濃度0.5μmol/mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣品質(zhì)量，g ；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；103 ：1μmol/ L=103μmol/ mL
注意事項(xiàng)：
1. 血清樣本請(qǐng)?jiān)?4小時(shí)內(nèi)測(cè)定，或者4℃密封避光保存不超過(guò)72小時(shí)。
2. 吸光值大于0.8可用蒸餾水稀釋樣本，并在計(jì)算公式中算入稀釋倍數(shù)。
3. *低檢出限為10μmol/L。
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