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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 應用領域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,化工,生物產(chǎn)業(yè),農(nóng)林牧漁,制藥/生物制藥 |
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酸性木聚糖酶測試盒/酸性半纖維素酶測試盒
微量法100T/48S
注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義：
木聚糖酶(EC 3.2.1.8)主要由微生物產(chǎn)生，能催化水解木聚糖，也被稱為戊聚糖酶或半纖維素酶，可分解釀造或飼料工業(yè)中的原料細胞壁以及β-葡聚糖，降低釀造中物料的粘度，促進有效物質(zhì)的釋放，以及降低飼料中的非淀粉多糖，促進營養(yǎng)物質(zhì)的吸收利用，因而廣泛的應用于釀造和飼料工業(yè)中，ACX一般分離自耐酸的真菌，細菌及部分霉菌。
測定原理：
ACX在酸性環(huán)境下能將木聚糖降解成還原性寡糖和單糖，進一步在沸水浴條件下與3,5-二硝基水楊酸發(fā)生顯色反應，在540nm處有特征吸收峰，反應液顏色的深淺與酶解產(chǎn)生的還原糖量成正比，通過測定反應液在540nm吸光值增加速率，可計算ACX活力。
自備實驗用品及儀器：
天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋，可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。
試劑組成和配制：
緩沖液：液體90mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。（若出現(xiàn)白色絮狀或顆粒狀沉淀，可60℃加熱溶解后使用）。
試劑二：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
粗酶提?。?/p>
發(fā)酵液：發(fā)酵液于8000g，4℃，離心15min，取上清，作為待測樣品。
酶干粉：稱約0.1mg，加1mL緩沖液溶解待測。
組織樣本：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL緩沖液）進行冰浴勻漿，然后8000g，4℃，離心10min，取上清待測。
測定操作表：
分光光度計/酶標儀預熱30min，調(diào)節(jié)波長至540nm。
2、操作表
對照管 | 測定管 | |
樣品（μL） | 60 | |
滅活的樣品（μL） （95℃水浴15min） | 60 | |
緩沖液（μL） | 90 | 90 |
試劑一（μL） | 60 | 60 |
混勻，50℃水浴中反應30min，立即沸水浴中10min滅活。(注意不要讓蓋子爆開，以免進水，改變了反應體系) | ||
試劑二（μL） | 90 | 90 |
混勻，沸水浴顯色5min，取200µL于微量石英比色皿/96孔板中540nm處測定吸光值A，計算ΔA=A測定管-A對照管。每個測定管設一個對照管。 | ||
ACX計算公式：
用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 2.5554x - 0.002 ，R2 = 0.9983
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 435× (ΔA+0.002)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 435×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.002）÷2.5554÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 435×(ΔA +0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5；
106：轉(zhuǎn)化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 1.2777x - 0.002 ，R2 = 0.9983
1. 按液體體積活力計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫升液體樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mL）= （ΔA+0.002）÷1.2777÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106
= 869.6× (ΔA+0.002)
2. 按蛋白濃度計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每毫克蛋白每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/mg prot）= （ΔA +0.002）÷1.2777÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷Cpr
= 869.6×(ΔA +0.002 ) ÷Cpr
3. 按鮮重計算：
酶活定義：50℃，pH4.8條件下，每克樣本每分鐘分解木聚糖產(chǎn)生1nmol 還原糖所需的酶量為一個酸性木聚糖酶的活力單位。
ACX活力（nmol/min/g鮮重）= （ΔA +0.002）÷1.2777÷150÷T×稀釋倍數(shù)×106÷W
= 869.6×(ΔA +0.002 ) ÷W
150：木糖的分子量；T：反應時間，30min；稀釋倍數(shù)=V反總÷V樣=300µL÷60µL=5；
106：轉(zhuǎn)化因子，即1mg/mL=106ng/mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。
注意事項
1. 吸光度變化應該控制在0.01～0.8之間，否則加大樣品量或稀釋樣品，注意計算公式中參與計算的稀釋倍數(shù)要相應改變。
2. 試劑盒2-8℃保存，保質(zhì)期3個月，建議盡快使用。
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